紅景天甙對皮膚光老化干預(yù)作用及其機理探討.pdf

1、紅景天甙是中草藥紅景天中的一種主要有效成分。本研究目的是證實紅景天甙對皮膚光老化有保護作用，探討紫外線輻射后，皮膚成纖維細胞凋亡率的變化及紅景天甙干預(yù)作用的效果和可能機理。皮膚光老化是由于長期日光中的紫外線輻射(UVR)造成的，主要與真皮膠原蛋白的過度降解及彈性蛋白的不規(guī)則沉積有關(guān)，而膠原蛋白是由成纖維細胞合成的，因此皮膚光老化與成纖維細胞的損傷與凋亡關(guān)系密切。研究紫外線輻射后成纖維細胞的生物學(xué)性狀變化和紅景天甙的干預(yù)作用，在預(yù)防皮膚光

2、老化的發(fā)生中具有重要意義。本研究分二個部分探討了紅景天甙對體外培養(yǎng)的成纖維細胞在UVB、UVA輻射下的干預(yù)作用，及其可能的分子機制。 目的:第一部分：從細胞生長形態(tài)和細胞凋亡率上，探討紅景天甙對體外培養(yǎng)的成纖維細胞在UVB、UVA輻射下的干預(yù)作用。第二部分：從分子生物學(xué)角度，探討體外培養(yǎng)的成纖維細胞經(jīng)UVB、UVA輻射后，紅景天甙對細胞凋亡的干預(yù)作用及可能的分子機制。 方法:1．觀察成纖維細胞經(jīng)UVB、UVA輻射后細胞生

3、長形態(tài)變化以及加入紅景天甙的影響；采用流式細胞儀檢測對照組及實驗組成纖維細胞凋亡率的變化；探討紅景天甙對成纖維細胞經(jīng)UVB、UVA輻射后生長情況的干預(yù)作用；2．通過RT-PCR法檢測凋亡相關(guān)基因Fas和Bcl-2 mRNA表達的變化，探討紅景天甙抑制細胞凋亡與凋亡相關(guān)基因的關(guān)系；3．通過RT-PCR法檢測TNF—α及IL-1β的mRNA表達，探討紅景天甙抑制細胞凋亡與凋亡相關(guān)細胞因子的關(guān)系；4．應(yīng)用比色法檢測Caspase3、8，探討紅

4、景天甙對細胞凋亡信號傳導(dǎo)中Caspase通路的影響。 結(jié)果: 1．UVB、UVA輻射成纖維細胞后，細胞出現(xiàn)解體、排列紊亂、脫顆?，F(xiàn)象；加入紅景天甙后，體外培養(yǎng)成纖維細胞未出現(xiàn)明顯的數(shù)量上和形態(tài)學(xué)改變；紅景天甙在最終濃度為200 μg/ml時，從細胞數(shù)量和形態(tài)上觀察，體外培養(yǎng)成纖維細胞經(jīng)UVB、UVA照射未出現(xiàn)明顯的改變。體外培養(yǎng)的成纖維細胞經(jīng)UVB、UVA輻射后，出現(xiàn)明顯的凋亡峰，凋亡率升高；應(yīng)用紅景天甙后凋亡率下降。表明紅景天

5、甙對成纖維細胞由紫外線引起的凋亡具有保護作用。2．成纖維細胞Fas mRNA表達在UVB、UVA輻射組均有增加；應(yīng)用紅景天甙后，表達減弱。Bcl-2 mRNA表達經(jīng)UVB、UVA輻射后減弱，應(yīng)用紅景天甙后，表達增強。表明紅景天甙可以通過影響成纖維細胞Fas和Bcl-2的表達而發(fā)揮對紫外線引起細胞凋亡的保護作用。3．UVB、UVA輻射體外培養(yǎng)的成纖維細胞后，TNF-α及IL-1 β的mRNA表達比正常對照組增加；應(yīng)用紅景天甙后，TNF—α

6、及IL-1β的mRNA表達降低。表明紅景天甙減輕紫外線引起的皮膚光老化及炎癥反應(yīng)發(fā)生，與抑制TNF—α和IL—1β兩者mRNA表達有關(guān)。4．UVB、UVA輻射體外培養(yǎng)的成纖維細胞后，Caspase3、8活性均增高；應(yīng)用紅景天甙后，Caspase3、8活性均降低。表明紅景天甙減輕紫外線引起的皮膚光老化及炎癥反應(yīng)發(fā)生，與抑制Caspase通路中Caspase3、8活性有關(guān)。 結(jié)論:從細胞形態(tài)學(xué)上觀察，UVB、UVA輻射對皮膚成纖維細