AngⅡ上調(diào)Th17-IL-17表達(dá)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響研究.pdf

1、目的：通過貝那普利抑制AngⅡ生成，觀察AngⅡ?qū)?dòng)脈粥樣硬化形成的影響，并在此基礎(chǔ)上探討Th17/IL-17在AngⅡ調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用。
　　方法：⑴參照Chekanov及于麗娜介紹的方法，通過導(dǎo)管球囊損傷血管加高脂飼養(yǎng)的方法建立兔動(dòng)脈粥樣硬化模型。飼養(yǎng)12周后用超聲探查兔左側(cè)頸總動(dòng)脈斑塊證實(shí)模型成功。⑵實(shí)驗(yàn)分組、飼養(yǎng)與給藥:新西蘭大白兔22只，隨機(jī)分正常對(duì)照組6只，造模兔16只，造模兔行導(dǎo)管球囊損傷左側(cè)頸總動(dòng)脈后，

2、又隨機(jī)分為高脂組，貝那普利組。正常對(duì)照組，每只實(shí)驗(yàn)兔飼養(yǎng)普通飼料100 g/d，早晚各50g。高脂組，每只實(shí)驗(yàn)兔飼養(yǎng)高脂飼料100 g/d，早晚各50g，并定時(shí)按2 mg·kg-1·d-1行生理鹽水灌胃。貝那普利組，每只實(shí)驗(yàn)兔飼養(yǎng)高脂飼料100 g/d，早晚各50g，并定時(shí)按2 mg·kg-1·d1行貝那普利灌胃。⑶飼養(yǎng)12周后，通過肉眼及HE染色法觀察兔動(dòng)脈粥樣斑塊及脂質(zhì)的大小;用全自動(dòng)7600生化分析儀檢測(cè)兔血清血脂水平;用放射免疫

3、試劑盒檢測(cè)兔血漿AngⅡ水平;用ELISA試劑盒檢測(cè)兔血漿IL-17水平;用RT-PCR檢測(cè)兔脾臟組織ROR-γt mRNA水平;用ELISA試劑盒檢測(cè)兔血漿hs-CRP水平。
　　結(jié)果：①在實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)驗(yàn)兔死亡4只，存活18只，動(dòng)物存活率為81.81％。②飼養(yǎng)12周后，正常對(duì)照組兔主動(dòng)脈內(nèi)膜肉眼觀為內(nèi)膜光滑、平整、沒有油脂狀物質(zhì)增生;高脂組兔主動(dòng)脈內(nèi)膜肉眼觀為內(nèi)膜可見一層油脂狀物質(zhì)，表面凹凸不平，突出管腔明顯;貝那普利組兔主動(dòng)脈

4、內(nèi)膜肉眼觀為內(nèi)膜可見一層油脂狀物質(zhì)，表面凹凸不平，突出管腔，與高脂組比較，病變程度減輕。正常對(duì)照組兔主動(dòng)脈病理切片為內(nèi)膜光滑，平整，無泡沫細(xì)胞;高脂組兔主動(dòng)脈病理切片為內(nèi)膜增生明顯，大量泡沫細(xì)胞堆積，膠原、鈣化及脂質(zhì)沉積，斑塊破裂;貝那普利組兔主動(dòng)脈病理切片為內(nèi)膜增生明顯，膠原沉積、鈣化及脂質(zhì)沉積，與高脂組比較，病變程度減輕。③飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血脂水平:正常對(duì)照組的TC、TG、HDL-C、LDL-C、 VLDL-C水平分別為1.2

5、9±0.71mmol/L、1.16±0.68mmol/L、0.51±0.15mmol/L、0.65±0.50mmol/L、0.67±0.16mmol/L;高脂組的TC、TG、HDL-C、LDL-C、VLDL-C水平分別為29.1±1.86mmol/L、5.89±5.91mmol/L、1.19±2.66mmol/L、19.0±1.03mmol/L、8.02±2.78mmo1/L;貝那普利組的TC、TG、HDL-C、LDL-C、VLDL-C

6、水平分別為28.7±1.50mmol/L、6.64±5.69mmol/L、2.42±2.45mmol/L、16.7±4.37mmol/L、6.93±2.91mmol/L。通過單因素方差分析正常對(duì)照組、高脂組、貝那普利組的TC、LDL-C、VLDL-C的F值分別為737.29、88.95、20.07，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;正常對(duì)照組、高脂組、貝那普利組的TG、HDL-C的F值分別為2.36、1.135，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過SNK-q兩兩

7、分析，高脂組、貝那普利組與正常對(duì)照組之間的TG、LDL-C、VLDL-C水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高脂組與貝那普利組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血漿AngⅡ水平:正常對(duì)照組為1238.32±125.60pg/mL，高脂組為1554.38±32.23 pg/mL，貝那普利組為1419.76±32.78 pg/mL。通過單因素方差分析，正常對(duì)照組、高脂組、貝那普利組之間的血漿AngⅡ F值為25.32，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，通

8、過SNK-q兩兩分析，高脂組、貝那普利組、正常對(duì)照組之間血漿AngⅡ水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑤飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血漿IL-17水平:正常對(duì)照組為96.79±28.29pg/mL，高脂組為221.50±36.54 pg/mL，貝那普利組為157.05±41.68 pg/mL。通過單因素方差分析，正常對(duì)照組、高脂組、貝那普利組的血漿血漿IL-17的F值為18.08，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，通過SNK-q兩兩分析，高脂組、貝那普利組、正常對(duì)照組

9、之間血漿IL-17水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑥飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔脾臟組織ROR-γt mRNA水平表達(dá)，以ROR-γt/β-actin相對(duì)比表示，分別為0.4、0.96、0.76;通過單因素方差分析，正常對(duì)照組、高脂組、貝那普利組的脾臟組織ROR-γt mRNA相對(duì)表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，通過SNK-q兩兩分析，高脂組、貝那普利組與正常對(duì)照組之間ROR-γt/β-actin相對(duì)比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑦飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血漿Ang

10、Ⅱ水平與IL-17水平成正相關(guān)，r和直線回歸方程分別為r=0.79，Y=0.33X-301.1?；貧w系數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑧飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血漿AngⅡ水平與ROR-γt/β-actin相對(duì)比值成正相關(guān)，r和直線回歸方程分別為r=0.67，Y=0.001X-1.38。回歸系數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑨飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血漿hs-CRP水平:正常對(duì)照組為0.96±0.42mg/L，高

11、脂組為21.91±5.02mg/L，貝那普利組為13.23±4.02mg/L。通過單因素方差分析及SNK-q兩兩分析，正常對(duì)照組、高脂組、貝那普利組之間的血漿hs-CRP水平的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑩飼養(yǎng)12周后各組實(shí)驗(yàn)兔血漿IL-17水平與hs-CRP水平成正相關(guān)，r和直線回歸方程分別為r=0.74，Y=0.11X-5.75。回歸系數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.05，方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：⑴通過導(dǎo)管球囊損傷血管加高脂飼養(yǎng)的方法可以