支原體在性傳播感染中的作用及其耐藥機(jī)理研究.pdf

1、目的：1、全面了解Uu、Mh、Mg、Mf、Mpe和Mpi等6種支原體在HIV陽(yáng)性者、AIDS患者、其他性病患者及高危人群、婦科生殖道炎癥患者、健康女性和男性等多種不同人群中的流行特征；2、在女性人群進(jìn)一步探討 Uu 和 Mh的致病性：3、研究Uu和Mh的耐藥現(xiàn)狀并提出合理的用藥建議；4、探討Uu對(duì)四環(huán)素類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物的耐藥機(jī)制；5、研究支原體與淋病奈瑟菌的合并感染狀況及淋病奈瑟菌的耐藥性和耐藥機(jī)制。 研究方法：1

2、、研究對(duì)象分別來(lái)自江蘇省南京、南通、無(wú)錫以及徐州的性病監(jiān)測(cè)醫(yī)院或/和門(mén)診就診者，某綜合性醫(yī)院婦科門(mén)診患者，部分單位健康體檢者，以及省內(nèi)幾個(gè)主要地區(qū)的HIV陽(yáng)性者和AIDS患者。2、采用流行病學(xué)現(xiàn)況調(diào)查的方法，在上述各人群中開(kāi)展問(wèn)卷調(diào)查、采集泌尿生殖道分泌物標(biāo)本或/和首段尿，并對(duì)每個(gè)個(gè)體進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢查和臨床診斷。3、用法國(guó)梅里埃支原體培養(yǎng)及鑒定試劑進(jìn)行Uu與Mh的初步分離和鑒定，并進(jìn)一步經(jīng)過(guò)濾培養(yǎng)和特異性PCR試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。4、比較 HIV

3、陽(yáng)性者、AIDS患者、其他性病患者及其性病高危人群、健康體檢者、婦科生殖道感染者等人群6種支原體檢出情況，并分析其流行特征。5、在性病女患者、婦科炎癥患者及女性健康體檢者分析 Uu、Mh的檢出情況、比較其感染濃度，分析支原體的致病性與感染濃度、基因分型的關(guān)系，并通過(guò)隨訪觀察正常人群中支原體的自然消長(zhǎng)情況及臨床患者在實(shí)施抗支原體治療前后，其臨床癥狀和支原體感染濃度的變化。6、采用叉生分析法分析Uu、Mh與其它婦科生殖道常見(jiàn)病原體之間的交互

4、作用。7、先期采用法國(guó)梅里埃支原體藥敏試劑盒定性檢測(cè)Uu、Mh臨床分離株的耐藥性，后期應(yīng)用微量肉湯稀釋法檢測(cè)八種抗生素對(duì)確認(rèn)的Uu、Mh的最小抑菌濃度。8、按藥敏結(jié)果分層，在部分Uu菌株中進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)和分析，采用Blast比對(duì)法比較臨床菌株序列與標(biāo)準(zhǔn)菌株序列的差異。9、在各性病監(jiān)測(cè)點(diǎn)調(diào)查支原體與淋病合并感染狀況，對(duì)淋球菌進(jìn)行相應(yīng)的藥敏試驗(yàn)和耐藥基因檢測(cè)及序列分析，主要實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法與支原體研究相同。 研究結(jié)果： 1．

5、支原體感染的流行特征研究結(jié)果,多因素分析顯示女性及小于25歲是性病門(mén)診患者Uu或/和Mh感染的危險(xiǎn)因素。 2．Uu、Mh在女性人群中的致病性研究結(jié)果：(1)序貫試驗(yàn)顯示Uu、Mh在陰道穹窿部的檢出均高于子宮頸，這種差異在生殖道不同部位感染者及非生殖道感染者中均存在。(2)本研究共調(diào)查檢測(cè)女性609例，Uu、Mh平均總陽(yáng)性率為59.44％，其中性病及高危人群、婦科炎癥患者、健康體檢者的Uu、Mh總陽(yáng)性率分別為79.66％、75.3

6、1％3,44.38％，健康者的支原體陽(yáng)性率顯著低于性病人群和婦科炎癥患者。(3)性病患者、婦科炎癥患者和健康體檢者Uu感染的平均濃度分別為10<'3.23>、10<'3.33>、和10<'2.46>CCU，Mh感染的平均濃度分別為10<'3.00>、10<'3.09>和10<'1.78>CCU，健康體檢者支原體感染濃度顯著低于性病患者和婦科炎癥患者。(4)目前有21例被納入抗支原體治療的婦科炎癥患者接受了治療后的復(fù)查，經(jīng)比較治療后感染的

7、平均CCU均有明顯下降，與之相對(duì)應(yīng)的是疾病癥狀體征的明顯改善或全愈。(5)3次隨訪結(jié)果顯示健康體檢人群支原體的攜帶濃度較低，且CCU濃度無(wú)顯著變化。 3．Uu和Mh的耐藥性研究結(jié)果：(1)在定性藥敏試驗(yàn)中，Uu對(duì)環(huán)丙沙星和氧氟沙星的耐藥率為87.8％和46.3％，對(duì)其它藥物耐藥率均低于10％；Mh對(duì)環(huán)丙沙星和氧氟沙星的耐藥率為62.5％和43.8％，對(duì)紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素的耐藥率分別為100％、62.5％、100％1 Uu

8、和Mh對(duì)強(qiáng)力霉素、交沙霉素、原始霉素均較敏感，耐藥率都在5％以下。其中，Uu對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率顯著高于Mh，而 Mh對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物的耐藥率明顯高于Uu。(2)在定量藥敏試驗(yàn)中，米諾環(huán)素、四環(huán)素、克拉霉素、阿奇霉素、紅霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星和左旋氧氟沙星對(duì)Uu的MIC<,50>(50％的菌株被抑制的濃度)分別為<0.0625、<0.125、0.25、1、2、8、4和2mg/L；MICgo(90％的菌株被抑制的濃度)分別為0.125、1、

9、1、4、8、64、16和8mg/L。Uu臨床株對(duì)8種藥物耐藥率從高到低分別為環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星、氧氟沙星、紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、四環(huán)素和米諾環(huán)素。40.47％的菌株都同時(shí)對(duì)3種以上的抗生素有耐藥性。(3)所有Mh菌株對(duì)米諾環(huán)素和四環(huán)素100％敏感，對(duì)克拉霉素和阿奇霉素100％耐藥，對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物的敏感性也較低。(4)不同生物型別的Uu對(duì)四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)藥物的MIC水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表現(xiàn)為生物2型高于生物1型

10、。 4．Uu的耐藥機(jī)制研究結(jié)果：(1)在52株具有定性藥敏試驗(yàn)結(jié)果的Uu菌株中，對(duì)四環(huán)素敏感株、中敏株、耐藥株tetM檢出率分別為26.7％、71.4％、86.7％；tetM基因陽(yáng)性菌株產(chǎn)生四環(huán)素耐藥的危險(xiǎn)性是tetM基因陰性菌株的17.785倍。(2)在34株非四環(huán)素耐藥的Uu菌株中，有7株檢測(cè)到tetM基因;tetM基因陽(yáng)性組的四環(huán)素和米諾環(huán)素的MIC水平顯著高于tetM陰性組。(3)發(fā)生gyrA基因突變的均為氟喹諾酮類(lèi)藥物

11、的耐藥菌株和中度敏感菌株，在敏感菌株沒(méi)有發(fā)現(xiàn)gyrA基因突變；環(huán)丙沙星耐藥組gyrA基因突變率(65％)明顯高于環(huán)丙沙星中敏組(25％)和敏感組(0)。(5)在選取的部分紅霉素耐藥菌株中擴(kuò)增23SrRNA基因片段進(jìn)行測(cè)序，均未發(fā)現(xiàn)突變點(diǎn)。 5．支原體與淋球菌合并感染及淋球菌耐藥性研究結(jié)果：(1)南京、徐州、無(wú)錫、南通等地區(qū)性病門(mén)診就診者中，淋病平均患病率為25.7％左右，男性顯著高于女性。(2)性病門(mén)診就診者中，淋病合并支原體感

12、染占37.8％。(3)頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、青霉素、大觀霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星對(duì)95株淋球菌的MIC<,50>分別為0.06、0.03、0.12、32、32、2、4、4μg/ml，MIC<,90>分別為0.12、0.06、0.5、64、32、64、16、8μg/ml。對(duì)幾種藥物耐藥率從高到低分別為環(huán)丙沙星(100％)、四環(huán)素(78.9％)、青霉素(68.4％)、大觀霉素(1.05％)。(4)95株淋球菌中，抗四環(huán)素淋病

13、奈瑟菌的陽(yáng)性率為28.4％；對(duì)四環(huán)素中度敏感株和耐藥株的term基因檢出率分別為0、44.7％，二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；TRNG株與非TRNG株tetM基因檢出率分別為93.3％、9.1％，二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 主要研究結(jié)論： 1．Uu、Mh、Mg、Mf、Mpe和Mip等6種支原體存在于多種性傳播感染人群中，其中的艾滋病相關(guān)支原體Mf、Mpi在HIV陽(yáng)性者及AIDS患者中的感染率顯著高于其他人群，且感染率高低與H

14、IV感染的不同階段有關(guān)，AIDS發(fā)病期的感染率高于HIV感染潛伏期。感染率普遍較高的是Uu和Mh，其感染率存在地區(qū)差異和性別差異。 2．雖然Uu和Mh在女性人群中存在一定比例的無(wú)癥狀攜帶現(xiàn)象，但按照流行病學(xué)的病因判斷標(biāo)準(zhǔn)，在聯(lián)系強(qiáng)度、劑量反應(yīng)關(guān)系、分布的一致性、可逆轉(zhuǎn)性等多方面均已證實(shí)二者對(duì)女性生殖道炎性疾病的致病作用不容忽視，尤其是二者合并感染時(shí)更易導(dǎo)致疾病的發(fā)生，這種致病性與支原體的感染濃度CCU呈正相關(guān)，同時(shí)Uu、Mh與女

15、性生殖道常見(jiàn)致病病原體(陰道加德納氏菌、沙眼衣原體、假絲酵母菌等)在致病性上有相加和/或相乘的協(xié)同作用。本研究未顯示出不同生物型的Uu在致病性上存在差異。此外，由序貫試驗(yàn)研究結(jié)果顯示Uu、Mh的檢測(cè)應(yīng)取陰道后穹窿標(biāo)本或病變部位標(biāo)本，前者可減少漏診，后者更具針對(duì)性，同時(shí)結(jié)合支原體的感染濃度和受檢者的臨床癥狀與體征，以制定更科學(xué)的醫(yī)療決策。 3．在江蘇局部地區(qū)Uu臨床株對(duì)第1、2代氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥嚴(yán)重，此類(lèi)藥物不宜作為治療Uu感染

16、的一線(xiàn)藥物，而四環(huán)素類(lèi)藥物可以重新作為治療Uu感染的一線(xiàn)藥物，尤其是米諾環(huán)素抗菌效果最好，其次為克拉霉素和阿奇霉素。Mh株對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物具有天然的耐藥性，對(duì)四環(huán)素類(lèi)藥物則有較好的敏感性。不同生物型的Uu對(duì)四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)藥物的敏感性存在差異，生物2型的MIC平均水平高于生物1型，提示23SrRNA序列的差異與各類(lèi)藥物的耐藥性有一定的關(guān)系。 4．tetM基因是導(dǎo)致Uu菌株出現(xiàn)四環(huán)素類(lèi)耐藥的主要原因，但并非唯一原因

17、；Uu對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥主要是由于gyrA基因突變導(dǎo)致相應(yīng)氨基酸改變所介導(dǎo)，MIC水平與gyrA基因和parC基因突變密切相關(guān)；在耐紅霉素的Uu菌株中未出現(xiàn)其它微生物中存在的與紅霉素耐藥相關(guān)的23SrRNA基因的改變，由于擴(kuò)增與測(cè)序的片段有限，尚不能提供Uu對(duì)紅霉素的耐藥與23SrRNA基因之間的關(guān)系。Uu生物型與氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥相關(guān)的gyrA基因所表達(dá)的氨基酸改變有高度的相關(guān)性，生物2型均出現(xiàn)gyrA編碼氨基酸Asp95Glu的