扶正減毒顆粒對(duì)急性放射性肺損傷C57BL-6小鼠病理學(xué)變化和TNF-α水平影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 本課題擬用C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)象，在一次性大劑量胸部照射后的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，觀察受照射后小鼠一般狀況及外周血紅、白細(xì)胞變化，用光鏡觀察實(shí)驗(yàn)小鼠肺組織的放射損傷的病理改變，并以免疫組化法測(cè)定肺組織TNF-a的表達(dá)，評(píng)價(jià)扶正減毒顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠放射性肺損傷的防護(hù)作用，從炎癥細(xì)胞因子方面初步探討扶正減毒顆粒防護(hù)放射性肺損傷的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研發(fā)防治放射性肺損傷中藥新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 本實(shí)驗(yàn)選取C

2、57BL/6小鼠共54只，1-54編號(hào)，隨機(jī)分為3組：(1)空白對(duì)照組18只：經(jīng)胃灌注生理鹽水0.5ml/(只.d)；(2)單純照射組18只：全肺單次照射12gy+經(jīng)胃灌注生理鹽水0.5ml/(只.d)；(3)照射+扶正減毒顆粒18只：全肺單次照射12gy+扶正減毒顆粒0.5ml/(只.d)。扶正減毒顆粒與生理鹽水按1:5配成懸濁液，制備成0.2g/ml。藥物劑量的計(jì)算按人與動(dòng)物計(jì)量換算。生理鹽水及扶正減毒顆粒均為陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制

3、劑室提供。于照射前1周開(kāi)始灌胃，直至照射后一月結(jié)束，于照射后1天，14天，28天斷頸活殺實(shí)驗(yàn)組及相同鼠齡對(duì)照組小鼠，空白對(duì)照組，單純照射組和照射+中藥組各6只。各組每一時(shí)間點(diǎn)觀察小鼠精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)量、體重、分泌物及大便等一般狀況，外周血紅白細(xì)胞情況，小鼠肺臟做常規(guī)病理組織學(xué)與免疫組化分析。 結(jié)果： 1、動(dòng)物活體觀察發(fā)現(xiàn)，單純照射組小鼠與各中藥治療組相比，精神萎靡、進(jìn)食量、活動(dòng)量減少等表現(xiàn)出現(xiàn)較早，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，鼻周

4、紅赤、眼睛黃色分泌物、大便干硬等發(fā)生率較高?？瞻捉M，中藥加照射組小鼠精神狀態(tài)、進(jìn)食量、活動(dòng)量無(wú)顯著差別，但鼻周紅赤、大便干硬等發(fā)生率低于單純照射組。2、大體標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn)，單純照射組小鼠于照射第14天時(shí)見(jiàn)肺臟腫脹、表面鮮紅，并有暗紅色斑片狀出血；第28天時(shí)肺腫脹明顯，肺臟體積增大，表面瘀斑顏色轉(zhuǎn)暗；中藥加照射組第14天時(shí)肺臟表面見(jiàn)少量點(diǎn)狀出血，肺臟腫脹；第28天時(shí)肺臟表面少量暗紅色淤點(diǎn)，肺臟體積腫脹不明顯，可見(jiàn)瘀斑，蒼白實(shí)變?cè)钶^小。3、肺

5、組織病理鏡下觀察表明，單純照射組第14天時(shí)肺組織病變表現(xiàn)為肺間質(zhì)充血、出血、水腫明顯，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔可見(jiàn)少量紅細(xì)胞；第28天時(shí)急性炎癥明顯，肺泡間質(zhì)增厚，肺泡腔變小，血管內(nèi)皮大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)肺泡腔可見(jiàn)大量紅細(xì)胞。中藥加照射組照射后第1天肺間質(zhì)無(wú)變化、肺泡結(jié)構(gòu)基本正常，血管內(nèi)皮可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；第14天時(shí)肺間質(zhì)增厚不明顯，肺組織病變表現(xiàn)為肺間質(zhì)充血、出血、水腫明顯，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔可見(jiàn)少量紅細(xì)胞；第28天時(shí)肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度較單純

6、組明顯減輕，肺間質(zhì)充血、出血、水腫明顯纖減輕。通過(guò)免疫組織化學(xué)染色，應(yīng)用多功能真彩色形態(tài)學(xué)分析軟件JD-801D軟件測(cè)定TNF-a陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的表達(dá)。小鼠在照射后第1,14,28天在支氣管單純照射組與空白組有顯著性差異(P<0.01)，而應(yīng)用扶正顆粒加照射組表達(dá)明顯低于單純組(P<0.05)。 結(jié)論： 1、C57BL/6小鼠受照射后出現(xiàn)精神萎靡、進(jìn)食量、活動(dòng)量減少、鼻周紅赤、眼睛黃色分泌物、大便干硬，體重下降。肺臟表面腫脹

7、、充血及出血點(diǎn)，放射治療后小鼠外周紅、白細(xì)胞下降等表現(xiàn)與中醫(yī)“熱毒內(nèi)盛”及“熱傷肺絡(luò)”證相符，表明動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共36只造模成功。 2、應(yīng)用扶正減毒顆粒能減輕C57BL/6小鼠活體肺組織表面腫脹、出血、間質(zhì)充血、水腫及肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度。 3、扶正減毒顆粒對(duì)C57BL/6小鼠放射性肺損傷具有減輕放療副作用，主要體現(xiàn)在改善小鼠的一般情況和減輕外周血中紅、白細(xì)胞的下降。 4、扶正減毒顆?？擅黠@抑制C57BL/6小鼠肺組織中T