利用EST序列對(duì)二倍體棉種染色體物理序號(hào)的FISH定位.pdf

1、棉花染色體物理序號(hào)的確定大多以染色體全長(zhǎng)、著絲粒位置、臂長(zhǎng)、臂比等形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)為依據(jù)。但由于棉花染色體形體較小,很難從形態(tài)上區(qū)分各條染色體,盡管有許多學(xué)者報(bào)道了棉花四倍體和二倍體核型的研究結(jié)果,并對(duì)其進(jìn)行了順序編號(hào),但不同學(xué)者之間依然存在著很大的分歧。
　　 本實(shí)驗(yàn)以四倍體棉公認(rèn)的起源二倍體種之一雷蒙德氏棉為材料,利用熒光原位雜交技術(shù)(FISH),選取較長(zhǎng)的單拷貝EST序列作為探針,旨在對(duì)雷蒙德氏棉13對(duì)粗線期染色體進(jìn)行FISH定

2、位,從而把染色體區(qū)分開。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.在國(guó)內(nèi)首次在棉花的花粉母細(xì)胞中制出了粗線期染色體制片。從D組野生棉遺傳圖譜每個(gè)連鎖群上選取3個(gè)EST序列,共選取39個(gè)EST序列作為探針,對(duì)每個(gè)探針設(shè)計(jì)引物,以雷蒙德氏棉基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增、回收、純化、測(cè)序,最終在每條染色體上篩選出一個(gè)單拷貝探針,共十三個(gè)探針對(duì)雷蒙德氏棉十三條粗線期染色體進(jìn)行FISH定位,探針長(zhǎng)度在866bp-1375bp之間。并最終將十三個(gè)EST探

3、針?lè)謩e定位到十三條雷蒙德氏棉粗線期染色體上。
　　 2.rDNA基因是高度保守的串聯(lián)重復(fù)序列,通過(guò)FISH技術(shù)對(duì)其在染色體上分布的位置、位點(diǎn)以及拷貝數(shù)多少進(jìn)行比較研究,是確定棉花起源與進(jìn)化的重要手段之一。根據(jù)棉花18SrDNA、5S rDNA基因序列設(shè)計(jì)引物,以陸地棉標(biāo)準(zhǔn)系TM-1基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增、回收、純化、測(cè)序。雷蒙德氏棉是棉花四倍體栽培種公認(rèn)的起源種之一,利用18SrDNA和5S rDNA基因?yàn)樘结?對(duì)雷蒙德氏棉