突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性在大鼠視覺(jué)發(fā)育及異常視覺(jué)經(jīng)驗(yàn)中的作用研究.pdf

1、目的：通過(guò)離體腦片膜片鉗方法記錄的視覺(jué)發(fā)育關(guān)鍵期前、關(guān)鍵期內(nèi)以及單眼形覺(jué)剝奪大鼠初級(jí)視皮層II/III層錐體神經(jīng)元的微小興奮性突觸后電流(mEPSCs)參數(shù)的分析，研究突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性在正常視覺(jué)發(fā)育及異常視覺(jué)環(huán)境下的作用機(jī)制，觀察天然藥物A對(duì)單眼形覺(jué)剝奪大鼠突觸自身穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的影響。 方法：1.正常視覺(jué)發(fā)育大鼠mEPSCs測(cè)定：生后4-21天Wistar大鼠分為三組：1周齡(P4-11)、2周齡(P12-16)及3周齡(P17-

2、21)。制作400μm厚度視皮層的離體腦片，全細(xì)胞模式膜片鉗記錄初級(jí)視皮層II/III層錐體神經(jīng)元的mEPSCs。Clampfit9.0和SPSSforWindows11.5分別對(duì)mEPSCs波幅、頻率、上升時(shí)間常數(shù)、下降時(shí)間常數(shù)及輸入阻抗等各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；2.單眼形覺(jué)剝奪及逆轉(zhuǎn)縫合大鼠mEPSCs測(cè)定：制作單眼形覺(jué)剝奪模型，分別測(cè)定剝奪后1-7天初級(jí)視皮層II/III層錐體神經(jīng)元mEPSCs，分析各項(xiàng)電流參數(shù)；單眼剝奪4

3、8h后逆轉(zhuǎn)縫合48h，進(jìn)行mEPSCs測(cè)定及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3.離體腦片灌流天然藥物A，測(cè)定II/III層錐體神經(jīng)元mEPSCs，并設(shè)立相應(yīng)天數(shù)的正常對(duì)照組。 結(jié)果：1.正常視覺(jué)發(fā)育大鼠mEPSCs：第1周隨年齡增加，波幅逐漸上升；P4及P6的頻率較低，P7至P11期間呈現(xiàn)一定上升趨勢(shì)，上升與下降時(shí)間常數(shù)隨年齡增加而縮短，后者變化顯著。本實(shí)驗(yàn)首次觀察到在P4-6出現(xiàn)“單通道樣”興奮性電流形態(tài)，P7呈現(xiàn)過(guò)渡型波形，隨后波形趨于正常。生

4、后2周波幅降低，頻率增加；生后3周波幅、頻率、上升時(shí)間常數(shù)、下降時(shí)間常數(shù)均無(wú)顯著變化，但波幅累積分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各實(shí)驗(yàn)組輸入阻抗無(wú)顯著差異。2.單眼形覺(jué)剝奪大鼠mEPSCs：剝奪側(cè)mEPSCs波幅較對(duì)照側(cè)顯著增加，頻率降低，下降時(shí)間常數(shù)不同程度延長(zhǎng)；形覺(jué)剝奪2d時(shí)，剝奪側(cè)mEPSCs波幅、頻率、下降時(shí)間常數(shù)變化最顯著；剝奪側(cè)與對(duì)照側(cè)波幅均較相應(yīng)天數(shù)的正常組增加、頻率降低、下降時(shí)間常數(shù)明顯延長(zhǎng)；逆轉(zhuǎn)縫合48h后，原剝奪側(cè)波幅下降、頻率

5、增加、下降時(shí)間常數(shù)縮短，與相應(yīng)日齡正常發(fā)育大鼠存在顯著性差異；與原對(duì)照側(cè)相比，逆轉(zhuǎn)縫合側(cè)mEPSCs波幅增加，頻率降低，上升時(shí)間常數(shù)及下降時(shí)間常數(shù)增加。3.天然藥物A作用后mEPSCs：?jiǎn)窝坌斡X(jué)剝奪1d-7d大鼠視皮層腦片在天然藥物A作用后均出現(xiàn)mEPSCs波幅下降、頻率上升及下降時(shí)間常數(shù)縮短，在剝奪3d、4d及7d還可見(jiàn)上升時(shí)間常數(shù)輕度縮短；單眼剝奪對(duì)照側(cè)初級(jí)視皮層II/III層錐體神經(jīng)元AMPA介導(dǎo)的mEPSCs在天然藥物A作用后，

6、波幅輕度下降，頻率輕度增加，上升時(shí)間常數(shù)、下降時(shí)間常數(shù)及輸入阻抗差異均無(wú)顯著性；天然藥物A對(duì)相應(yīng)日齡正常發(fā)育大鼠各項(xiàng)參數(shù)均無(wú)顯著影響。 結(jié)論：1.正常發(fā)育大鼠睜眼前初級(jí)視皮層II/III層錐體神經(jīng)元突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性變化不穩(wěn)定，隨著睜眼時(shí)間延長(zhǎng)，突觸自身穩(wěn)態(tài)可塑性逐漸下調(diào)，于三周后逐漸趨于穩(wěn)定。2.單眼剝奪后剝奪側(cè)初級(jí)視皮層II/III層錐體神經(jīng)元突觸自身穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)作用顯著上調(diào)，對(duì)側(cè)視皮層輕度上調(diào)；單眼剝奪2d即可達(dá)剝奪效力的峰值