化瘀理肺方經(jīng)抗氧自由基損傷作用防治大鼠肺纖維化的研究.pdf

1、目的：⑴建立大鼠肺間質(zhì)纖維化模型；⑵觀察化瘀理肺方對(duì)大鼠肺間質(zhì)纖維化形成的治療作用；⑶探討化瘀理肺方對(duì)大鼠肺間質(zhì)纖維化模型肺組織均漿中GSH、SOD及MDA含量的影響；⑷對(duì)比化瘀理肺方與氫化可的松琥珀酸鈉對(duì)大鼠肺間質(zhì)纖維化模型肺組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)及肺組織均漿中GSH、SOD及MDA含量的影響的差異。 方法：健康雄性Wistar大鼠84只，體重180～220g，購(gòu)于山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)SCX魯20050015）。隨

2、機(jī)分為4組，每組21只，模型組、中藥組、激素組與對(duì)照組，用1%戊巴比妥鈉（35mg. kg—1）腹腔注射麻醉后，將大鼠仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，固定頭和四肢，開(kāi)口器固定口腔，拉出舌，用壓舌板壓舌腹，在額鏡直視下，在大鼠吸氣瞬間，迅速將帶接頭的硬脊膜外麻醉導(dǎo)管插入氣管約1～2厘米，同時(shí)與1ml注射器相連，可見(jiàn)導(dǎo)管內(nèi)液體隨大鼠呼吸而波動(dòng)[12]，前三組氣管內(nèi)一次性灌注0.4%博萊霉素0.25mL（5mg. kg—1），第4組注入生理鹽水0.25m

3、l作為正常對(duì)照組，注入后立即旋轉(zhuǎn)動(dòng)物，使藥液在肺內(nèi)分布均勻。次日開(kāi)始，對(duì)照組與模型組每天給予生理鹽水2mL/只灌胃，中藥組每天給予化淤理肺方藥物17190mg. kg—1灌胃，激素組每天給予氫化可的松琥珀酸鈉25mg. kg—1腹腔注射。給藥過(guò)程中觀察動(dòng)物的一般情況：動(dòng)物活動(dòng)、體型、皮毛、精神狀態(tài)、飲食、糞便等。4組分別于第7、14、28天隨機(jī)處死7只。1%戊巴比妥鈉（35mg. kg—1）腹腔注射麻醉后仰臥固定，沿腹中線逐層切開(kāi)腹壁，

4、腹主動(dòng)脈放血處死分離肺組織，觀察各組大鼠雙肺外觀情況，取右肺，放入冷生理鹽水中漂洗除去浮血，濾紙吸干后，在冰浴上剪成碎塊，制成10%肺勻漿，3000r. min—1離心10min后取上清液于—70℃冰箱保存，備統(tǒng)一測(cè)定SOD、GSH、MDA，左肺浸于10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，用光鏡觀察。 結(jié)果：①各組大鼠一般情況觀察：進(jìn)入結(jié)果分析的大鼠84只，正常對(duì)照組大鼠無(wú)死亡，活動(dòng)良好，體格健壯，營(yíng)養(yǎng)好，皮毛光亮、致

5、密；模型組均有不同程度的咳嗽，呼吸困難，活動(dòng)量明顯下降，飲食差，體重下降，體格瘦小，精神萎靡；激素組造模后前期表現(xiàn)與模型組相似，治療1周后稍有好轉(zhuǎn)，但活動(dòng)量、消瘦未見(jiàn)明顯改善；中藥組開(kāi)始表現(xiàn)也與模型組相似，治療后進(jìn)食、體格、活動(dòng)量均明顯好轉(zhuǎn)，精神狀態(tài)較好。②肺組織肉眼觀察對(duì)照組雙肺外觀無(wú)異常，肺葉輪廓清晰，呈粉紅色，表面光滑，彈性良好；模型組第7天雙肺表面可見(jiàn)散在斑點(diǎn)狀出血，肺體積增大，14天雙肺體積縮小，彈性差，仍可見(jiàn)散在出血點(diǎn)，并可

6、見(jiàn)大小不等的散在結(jié)節(jié)狀改變，雙肺呈灰白色，第28天雙肺灰白色，體積明顯縮小硬度增加，肺表面可見(jiàn)大量結(jié)節(jié)樣改變；激素組與模型組相似，部分肺葉表面光滑，局部見(jiàn)大小不等結(jié)節(jié)樣改變，邊緣有點(diǎn)狀出血，部分肺葉體積縮??；中藥組與對(duì)照組相近，部分呈暗紅色，偶見(jiàn)大小不等結(jié)節(jié)樣改變，邊緣有點(diǎn)狀出血及部分肺葉體積縮小。③肺系數(shù)的比較：模型組與激素組第7、14天和28天肺系數(shù)均顯著大于對(duì)照組（P<0.01或P<0.05），中藥組第7、14天肺系數(shù)明顯大于對(duì)照

7、組（P<0.01或P<0.05），第28天肺系數(shù)與對(duì)照組無(wú)明顯差異，中藥組和激素組第7、14天和第28天肺系數(shù)均顯著小于模型組（P<0.01或P<0.05），中藥組和激素組肺系數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④肺組織光鏡病理學(xué)觀察對(duì)照組各時(shí)間段大鼠肺組織大多數(shù)結(jié)構(gòu)清晰，均未出現(xiàn)明顯形態(tài)學(xué)改變；模型組第7天炎癥明顯，可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并可見(jiàn)纖維細(xì)胞增多，第14天雙肺大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增寬并可見(jiàn)明顯增多的成纖維細(xì)胞，膠原纖維沉積，肺泡變形，

8、第28天可見(jiàn)肺部炎癥明顯減輕但可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞與膠原基質(zhì)，肺泡壁明顯增厚可見(jiàn)部分出現(xiàn)萎縮，肺泡間隔明顯增寬，肺泡大部分消失，肺部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況較前有所減輕；激素組肺泡炎的程度同模型組比較有明顯的減輕（P<0.01或P<0.05），肺纖維化程度與模型組比較有所減輕，但在第28天時(shí)不明顯（P>0.05）。中藥組肺纖維化的程度均較模型組明顯減輕（P<0.01），第28天時(shí)同激素組比較也有明顯的減輕（P<0.05），肺泡炎癥程度在各期均較模

9、型組減輕（P<0.01或P<0.05），但肺泡炎癥與纖維化同對(duì)照組比較仍較嚴(yán)重。⑤肺均漿中GSH、SOD及MDA含量變化模型組肺組織均漿中GSH第7天時(shí)明顯低于其它三組（P<0.01或P<0.05），第14天逐漸升高，但仍低于其它三組（P<0.01），第28天時(shí)基本恢復(fù)正常；中藥組與激素組GSH含量第7天降低，與對(duì)照組對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），第14天恢復(fù)正常。模型組肺均漿中SOD第7天明顯低于其它三組（P<0.01），第14天

10、升高，仍低于其它三組（P<0.01或P<0.05），第28天仍處于較低水平；中藥組與激素組第7天低于對(duì)照組（P<0.01），第14天逐漸升高，第28天恢復(fù)正常。模型組肺均漿中MDA第7天明顯高于其它三組（P<0.01），第14天逐漸降低，仍高于其它三組（P<0.01），第28天仍處于較高水平；中藥組與激素組第7天高于對(duì)照組（P<0.01），但明顯低于模型組（P<0.01），第14天逐漸降低，第28天基本恢復(fù)正常。 結(jié)論：⑴化瘀理