應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因?qū)ι圜[癌細胞增殖活性及iNOS表達影響的實驗研究.pdf

1、舌鱗狀細胞癌(T0ngue squamous cell carcinoma，TSCC)是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，約占頭頸部腫瘤的40-50﹪，目前主要的治療手段是手術(shù)、放療及化療，但總的治療效果不理想，5年生存率只有60﹪左右，且患者生存質(zhì)量不高。 癌的發(fā)生是一個多因素、多階段、復雜漸進的過程，干預(yù)或終止其中某個或多個相關(guān)因素或過程，能夠改變癌發(fā)生發(fā)展的進程，達到化學預(yù)防和治療的目的。針對腫瘤生長相關(guān)因子，在基因水平進行干預(yù)，

2、是惡性腫瘤的基因治療策略。 轉(zhuǎn)化生長因子-β是一類具有多種生物學效應(yīng)的多肽類細胞因子超家族，對機體許多組織細胞生長和分化具有重要的調(diào)節(jié)作用，其中轉(zhuǎn)化生長因子β1最為重要，機體多種細胞能分泌產(chǎn)生。許多腫瘤組織和細胞高表達TGF-β1，其刺激新血管生成，細胞遷徙及細胞外基質(zhì)堆積，導致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移。頭頸部腫瘤中TGF-β1的表達比正常組織中的表達要高；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較之無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移要高得多。 NO在體內(nèi)起重要的信

3、號傳到作用，NO與其合成酶-誘導型一氧化氮合酶(iNOS)在腫瘤發(fā)生發(fā)展有很多分子機制發(fā)揮作用，促進腫瘤血管生成、抑制細胞調(diào)亡等。頭頸部腫瘤中iNOS的表達升高明顯，與TGF-β關(guān)系密切，參與腫瘤新血管形成、細胞外基質(zhì)堆積，共同促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展，促進腫瘤的轉(zhuǎn)移浸潤。 RNA干擾(RNA interference，RNAi)是特異性基因表達沉默的強有力手段之一。 其廣泛存在真核生物中，是生物體在進化上的一種保守的基因組水

4、平的免疫監(jiān)控機制。具有高度特異性、高效率、放大效應(yīng)并可遺傳的特點。因此針對腫瘤基因在腫瘤細胞內(nèi)引發(fā)RNAi效應(yīng)，將可能開辟腫瘤基因治療的新途徑。本研究以人舌鱗癌Tca8113細胞為研究對象，探討RNA干擾技術(shù)沉默TGF-β1基因后對Tca8113細胞增殖活性及iNOS基因表達的影響。主要研究方法和結(jié)果有以下幾方面： 1.RNA干擾技術(shù)沉默TGF-β1基因?qū)ι圜[癌細胞增殖活性影響。 根據(jù)siRNA設(shè)計原則，設(shè)計針對TGF-

5、β1基因的siRNA，予以化學合成，應(yīng)用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE 2000介導轉(zhuǎn)染Tca8113細胞，并設(shè)置陰性對照組和空白對照組。用MTT法、免疫細胞化學及流式細胞儀分別檢測各組細胞。繪制細胞生長曲線，顯示轉(zhuǎn)染特異性TGF-β1基因siRNA片斷后，細胞生長受抑制明顯；免疫細胞化學顯示TGF-β1蛋白表達降低；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)沉默TGF-β1基因后，細胞凋亡明顯增加。 2．TGF-β1基因沉默對Tca8113細胞VE

6、GF及iNOS表達影響Tca8113細胞細胞培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)染特異性TGF-β1基因siRNA片斷并設(shè)置陰性對照組。以RT-PCR法檢測TGF-β1基因沉默后VEGF及iNOS基因表達。結(jié)果顯示基因沉默后TGF-β1、VEGF基因表達下調(diào)明顯，且iNOS基因表達也隨之下調(diào)。 結(jié)論 1.舌鱗癌Tca8113細胞中TGF-β1高表達； 2．通過RNAi可以降低TGF-β1基因的表達，達到基因沉默的效果； 3.RNA