K562細胞誘導分化過程中WT1基因表達及其異構(gòu)體比例變化的研究.pdf

1、目的：應用熒光定量RT-PCR技術(shù)，分析K562細胞株誘導分化過程中WT1基因及其四種異構(gòu)體表達水平及比例變化。探討WT1基因與細胞分化的關系，進一步闡明WT1基因在造血系統(tǒng)細胞增殖、分化中發(fā)揮的作用。 方法:1.建立熒光定量檢測系統(tǒng)。2.培養(yǎng)K562細胞，應用終濃度為10ng/ml佛波酯(12-tetradecanoylphorbol-13-acetate，TPA)誘導K562細胞分化，并采用NBT(硝基四氮唑藍)還原實驗及細

2、胞免疫表型檢測判斷細胞分化程度。3.實時熒光定量RT-PCR技術(shù)定量檢測K562誘導分化過程中總WT1基因及其17aa+，KTS+兩類異構(gòu)體的表達水平，β-actin作為內(nèi)參照。在此基礎上計算出WT1(+/+)、WT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四種異構(gòu)體在細胞分化過程中表達水平及比例的變化。 結(jié)果:1.以陽性標準品進行三條標準曲線的建立，其相關系數(shù)均達0.995以上。2.隨著藥物作用時間增加，NBT陽性率及C

3、D9表達陽性率均明顯增加(p＜0.05)。3.K562細胞誘導分化過程中總WT1出現(xiàn)兩次高表達。17aa+、KTS+兩類異構(gòu)體隨藥物作用時間的延長，其表達比例均逐漸下降。四種異構(gòu)體比例變化不一致。WT1(+/+)比例逐漸下降，0小時占0.40±0.19，96小時比例為0.15±0.07。而WT1(-/-)比例逐漸上升，0小時為0.15±0.11，96小時為0.38±0.12，另外兩種異構(gòu)體比例變化沒有顯著性差異。 結(jié)論:1.TP