BCl-2在離體大鼠缺血后適應心臟保護中的作用.pdf

1、目的:前期研究表明，Bcl-2可以介導骨骼肌遠端后處理對心臟的保護作用，且Bcl-2介導的骨骼肌遠端后處理的心臟保護作用通過mKATP和mPTP調節(jié)，mKATP和mPTP處于同一反應鏈上，mPTP可能位于mKATP下游（待發(fā)表）。本研究預觀察Bcl-2是否介導離體鼠缺血后適應對壞死心肌的保護作用，其介導的此保護作用是否經線粒體ATP敏感的鉀通道(Mitochondrial ATP-Sensitive K+Channels,mKATP),

2、bcl-2與mKATP的相對位置如何，及這種保護作用是否受神經反射調節(jié)？
　　 方法:健康SD大鼠30只，隨機分為5組(n=6)，腹腔注射3％戊巴比妥鈉（30mg/kg體重）麻醉后開胸心臟迅速離體并浸入0～4℃的K-H液中，輕輕擠出淤血，行主動脈插管，迅速懸掛心臟，將心臟懸掛在離體灌流系統(tǒng)上，經主動脈逆行灌注（整個過程要求2min內完成）。平衡灌流30分鐘后，停灌30分鐘，之后復灌2小時制作缺血再灌注模型。隨機分組如下:缺血再灌

3、注組(I/R)、缺血后適應組(PostC)、HA14-1+缺血再灌注組(HA14-1+I/R)、HA14-1+缺血后適應組(HA14-1+PostC)、HA14-1+5HD+缺血后適應組（HA14-1+5HD+PostC）。其中，HA14-1(2mg/Kg)是選擇性Bcl-2抑制劑;5HD(5mg/Kg)，即5羥基奎酸鹽，一種線粒體ATP敏感的鉀通道阻斷劑。然后以TTC法檢測梗死心肌范圍。經生理信號記錄分析系統(tǒng)記錄整個灌流過程中心率（H

4、R）、左室發(fā)展壓(LVDP)和左心室內壓最大上升速率(dp/dtmax)等的動態(tài)變化，收集冠脈流出液，記錄平衡30min末，再灌注1min、3min、5min、10min、20min、30min、1h、2h各個時間點的冠脈流出液(CBF)并分別測定相對應時間點內冠脈流出液中磷酸肌酸激酶(CK)活性和乳酸脫氫酶(LDH)活性。
　　 結果:
　　 1、大鼠離體心臟功能和心肌耗氧的觀察
　　 1.1、心率的變化

5、>　　 平衡灌流30分鐘末，即缺血前:各組間HR無明顯差異，(P＞0.05)。
　　 缺血30min期間:各組HR均逐漸下降至消失。
　　 再灌注2h末:各組HR較缺血前相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　 1.2、心臟做功（HR×LVDP）的變化
　　 平衡灌流30分鐘末，即缺血前:各組間心臟做功無明顯差異，（P＞0.05）。
　　 缺血30min期間:各組心臟做功逐漸消失。
　　

6、再灌注期間2h末:各組HR×LVDP較缺血前相比均有減小趨勢，但這種差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。各組間心臟做功無明顯差異，(P＞0.05)。
　　 1.3、再灌注2h末dp/dtmax恢復率的比較
　　 與I/R組相比PostC組dp/dtmax恢復率明顯增加，（47.10±7.26％vs27.77±12.76％,P＜0.05）。
　　 與I/R組相比HA14-1+I/R組dp/dtmax恢復率無明顯差異，

7、17.71±3.96％vs27.77±12.76％,P＞0.05。
　　 與PostC組相比HA14-1+PostC組dp/dtmax恢復率明顯減小(28.79±2.62％vs47.10±7.26％,P＜0.05)。
　　 與I/R組相比HA14-1+5HD+PostC組dp/dtmax恢復率無明顯差異，24.09±4.98％vs27.77±12.76％,P＞0.05。
　　 與PostC組相比HA14-1+5H

8、D+PostC組dp/dtmax恢復率明顯減小(24.09±4.98％vs47.10±7.26％,P＜0.05)。
　　 與HA14-1+PostC組相比HA14-1+5HD+PostC組dp/dtmax恢復率有減小趨勢，24.09±4.98％vs28.79±2.62％，但這種趨勢無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 1.4、再灌注2h末LVDP恢復率的比較
　　 與I/R組相比PostC組LVDP恢復率有增加的

9、趨勢，30.95±12.59％vs23.51±8.74％，但這種趨勢無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 與I/R組相比HA14-1+I/R組LVDP恢復率無明顯差異，17.33±4.91％vs23.51±8.74％,P＞0.05。
　　 與PostC組相比HA14-1+PostC組及HA14-1+5HD+PostC組LVDP恢復率均有減小的趨勢，27.33±11.17％vs30.95±12.59％，20.67±12.1

10、7％vs30.95±12.59％，但這種趨勢無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 與I/R組相比HA14-1+5HD+PostC組LVDP恢復率無明顯差異，20.67±12.17％vs23.51±8.74％,P＞0.05。
　　 2、心律失常觀察
　　 在平衡灌流期間，各組均未出現任何心律失常。再灌注期間，出現以室性早搏為主的心律失常，且多發(fā)生于再灌注前20min，未給予任何干預，各組間心律失常的發(fā)生無統(tǒng)計學差異

11、(P＞0.05)。
　　 3、心肌梗死程度測定
　　 從本研究中可以得知:缺血再灌注組(I/R)、缺血后適應組(PostC)、HA14-1+缺血再灌注組(HA14-1+I/R)、HA14-1+缺血后適應組(HA14-1+PostC)、HA14-1+5HD+缺血后適應組(HA14-1+5HD+PostC)梗死面積分別為:41.98±3.16％、16.96±1.79％、40.25±2.30％、25.25±4.59％、40.7

12、8±10.20％。
　　 與I/R組梗死程度相比，PostC組梗死面積明顯減少(16.96±1.79％vs41.98±3.16％，P＜0.05)。
　　 與I/R組梗死程度相比，HA14-1+I/R組梗死面積無明顯差距(40.25±2.30％vs41.98±3.16％,P＞0.05)。
　　 與PostC組相比，HA14-1+PostC組梗死面積明顯增加(25.25±4.59％vs16.96±1.79％,P＜0.

13、05)。
　　 與I/R組相比，HA14-1+5HD+PostC組梗死面積無明顯減小(40.78±10.20％vs41.98±3.16％,P＞0.05)。
　　 與PostC組相比，HA14-1+5HD+PostC組梗死面積明顯增加(40.78±10.20％vs16.96±1.79％,P＜0.05)。
　　 與HA14-1+PostC組相比，HA14-1+5HD+PostC組梗死面積明顯增加(40.78±10.2

14、0％vs25.25±4.59％,P＜0.05)。
　　 4、冠脈流出液中肌酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)的變化
　　 本試驗中動態(tài)觀察了不同組別之間在缺血再灌注期間心肌酶LDH、CK隨時間釋放的動態(tài)變化。
　　 缺血前，各組冠脈流出液中LDH及CK水平均無明顯差異（P＞0.05）。
　　 缺血再灌注期間各組冠脈流出液中LDH及CK活性均出現不同水平增高，與各組缺血前相比有明顯差異(P＜0.05)，在

15、3-5min內達到高峰后逐漸下降。.....
　　 再灌注第1min內與I/R組相比，PostC組冠脈流出液中CK活性明顯降低，這種差距有統(tǒng)計學意義(38.44±5.43IU/mLvs79.98±28.32IU/mL，P＜0.05)。
　　 再灌注第3min內與I/R組相比，PostC組冠脈流出液中CK活性明顯降低，這種差距有統(tǒng)計學意義(71.62±15.38IU/mLvs120.82±35.52IU/mL，P＜0.05

16、);與PostC組相比，HA14-1+5HD+PostC組LDH活性明顯增加（107.84±44.68IU/mLv71.62±15.38IU/mL,P＜0.05）。
　　 再灌注第5min內與I/R組相比，PostC組冠脈流出液中LDH活性明顯降低，這種差距有統(tǒng)計學意義（186.12±29.89IU/mLvs103.42±38.13IU/mL，P＜0.05）;與PostC組相比，HA14-1+PostC組、HA14-1+5HD+

17、PostC組LDH活性明顯增加(169.50±17.22IU/mLvs103.42±38.13IU/mL,182.60±10.47IU/mLvs103.42±38.13IU/mL,P＜0.05)。
　　 再灌注第10min內，與I/R組相比，PostC組冠脈流出液中LDH活性明顯降低，這種差距有統(tǒng)計學意義(86.47±37.80IU/mLvs173.86±35.79IU/mL，P＜0.05);與PostC組相比，HA14-1+5

18、HD+PostC組LDH活性明顯增加（174.80±15.79IU/mLvs86.47±37.80IU/mL，P＜0.05）。
　　 再灌注第20min內，與I/R組相比，PostC組冠脈流出液中LDH活性明顯降低，這種差距有統(tǒng)計學意義（64.64±14.07IU/mLvs150.41±22.98IU/mL，P＜0.05）;與PostC組相比HA14-1+PostC組CK活性明顯增加，這種差距有統(tǒng)計學意義（65.2±11.95I

19、U/mLvs38.94±14.81IU/mL，P＜0.05）;HA14-1+5HD+PostC組LDH活性較PostC組相比明顯增加且差距有統(tǒng)計學意義，(153.51±7.93IU/mLvs64.64±14.07IU/mL，P＜0.05)。
　　 再灌注第30min內，與I/R組相比，PostC組冠脈流出液中CK活性明顯降低，這種差距有統(tǒng)計學意義（27.24±9.96IU/mLvs58.18±16.86IU/mL，P＜0.05）

20、;與PostC組相比HA14-1+PostC組CK活性明顯增加，這種差距有統(tǒng)計學意義(50.72±6.10IU/mLvs27.24±9.96IU/mL，P＜0.05)，HA14-1+5HD+PostC組CK活性明顯增加，(61.38±26.06IU/mLvs27.24±9.96IU/mL,P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1、Bcl-2部分介導缺血后適應對離體心臟的保護作用，這種保護作用不受神經反射調節(jié)。