2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本研究首先探討了Akt信號通路中多個效應因子的表達水平與膀胱癌的進展之間的關系,然后通過Akt靶向抑制劑MK2206對膀胱癌細胞作用后,研究MK2206在提高順鉑(CDDP)誘導的對腫瘤細胞毒性及凋亡中的作用,進而為探索新的增強腫瘤細胞化療敏感性的分子指標及可能的加速殺傷腫瘤細胞作用機制,改善傳統(tǒng)的化療方案提供新的實驗依據(jù)。
  方法:
  (1)培養(yǎng)膀胱癌細胞并通過免疫印跡方法檢測各種細胞株中Akt及Akt信號通路中

2、下游分子的表達水平,包括RT112,RT4,253J,J82,T24,UMUC3等。
  (2)采用細胞活性實驗(四甲基偶氮唑藍法,MTT)法檢測MK2206和CDDP各自對膀胱癌細胞的抑制作用,計算CDDP的半數(shù)抑制濃度(50% inhibitingconcentration,IC50),并然后通過免疫印跡方法檢測各膀胱癌細胞在MK2206和CDDP各自作用后的磷酸化Akt及凋亡相關蛋白的表達情況;通過MTT檢測MK2206+C

3、DDP的聯(lián)合治療對各膀胱癌細胞(RT112,253J,UMUC3,T24)的生長抑制作用,并通過免疫印跡方法檢測聯(lián)合治療后的T24及RT112中Akt信號通路中各分子指標的表達水平及凋亡相關蛋白的表達情況,探討聯(lián)合治療中MK2206增加CDDP誘導的對腫瘤細胞毒性及凋亡的分子通路機制。
  (3)采用Transwell細胞侵襲實驗檢測MK2206抑制浸潤性膀胱癌細胞株UMUC3的侵襲能力,并通過免疫印跡方法檢測與侵襲有關的上皮間充

4、質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中各指標snail,slug及ZEB1的表達水平變化,探討MK2206抑制細胞侵襲能力的作用機制。
  (4)采用膀胱癌細胞株RT112建立膀胱癌動物模型(小鼠皮下腫瘤模型),研究各種藥物的體內(nèi)治療腫瘤的效果;采用腹腔注射的方法將藥物注射到小鼠體內(nèi)并分組,對照組(DMSO)、CDDP組、MK2206組、MK2206+CDDP組,觀察各組中對膀胱癌皮下腫瘤生長的影響情況,并通過免疫組織化學染色的方法檢測四組動物模型中

5、的皮下腫瘤標本的Ki-67表達,分析各組藥物對腫瘤細胞增殖的抑制情況。
  結(jié)果:
  (1)蛋白免疫印跡檢測在肌層浸潤性膀胱癌細胞株中(253J,J82,T24,UMUC3)磷酸化Akt及下游的效應分子表達增強,而在非肌層浸潤性膀胱癌細胞株中(RT112,RT4)磷酸化Akt及下游的效應分子無表達或弱表達。
  (2) MTT細胞活性實驗檢測MK2206(500nM)聯(lián)合CDDP可以提高CDDP誘導的對腫瘤細胞毒性作

6、用,從而增加膀胱癌腫瘤細胞對CDDP的敏感性。蛋白免疫印跡檢測到聯(lián)合CDDP治療,MK2206(500nM)可以增強CDDP引導的腫瘤細胞凋亡效應,而這種凋亡效應依賴于磷酸化Akt及其下游效應分子表達水平的抑制。
  (3) MK2206(500nM)抑制磷酸化Akt及下游效應分子表達水平,還可以抑制UMUC3的侵襲能力,并且抑制侵襲相關蛋白snail,slug及ZEB1的表達水平,這些指標也與化療敏感性密切相關。
  (4

7、)體內(nèi)試驗結(jié)果表明聯(lián)合治療組(MK2206+CDDP)能抑制皮下腫瘤的生長趨勢,而且能明顯抑制腫瘤細胞的增殖情況。
  結(jié)論:
  (1)磷酸化Akt及下游效應分子的表達增強與膀胱癌的進展密切相關。
  (2)Akt靶向抑制劑MK2206可以抑制肌層浸潤性膀胱癌細胞株的侵襲能力,抑制細胞的侵襲能力與侵襲相關蛋白表達水平的降低有緊密關系。
  (3)Akt靶向抑制劑MK2206聯(lián)合CDDP可以通過抑制Akt表達及A

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