siRNA抑制Livin基因的表達對人膀胱癌EJ細胞生長及化療敏感性的影響.pdf

1、目的：Livin是IAP家族的最新成員。其在正常膀胱組織中不表達，而在人膀胱癌細胞中的高表達可刺激腫瘤細胞的增殖，并提高膀胱癌的術后復發(fā)率，更能使腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性。因此，其可成為膀胱癌的治療靶點及預后復發(fā)的監(jiān)測指標。本研究通過觀察siRNA抑制人膀胱癌EJ細胞中Livin基因的表達對細胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響，為膀胱癌發(fā)病機制的研究，以及對膀胱癌的基因和化學治療提供理論基礎和實驗依據(jù)。
　　方法：⑴觀察通過不同條

2、件轉染過的EJ細胞，進行siRNA轉染細胞條件的優(yōu)化及效率的評價。⑵采用脂質體轉染技術將人工合成的特異性Livin siRNA轉入人膀胱癌EJ細胞中。⑶經Livin siRNA轉染細胞24h后，半定量RT-PCR檢測各組EJ細胞中Livin mRNA的表達。⑷Western Blot進一步驗證轉染48h后細胞中Livin蛋白的表達。⑸選用THP作用于轉染和未轉染的細胞，CCK-8法檢測各組細胞的增殖抑制率。(6)流式細胞術檢測各組細胞的

3、凋亡情況。
　　結果：①用FAM標記的Negative control siRNA轉染6孔板中的人膀胱癌EJ細胞，觀察到當細胞數(shù)量為3×i05/孔，siRNA為100pmol/孔、Lipofectamine(R)2000試劑為5μ l/孔時，有較高轉染效率(70％)。當細胞密度為4×103/孔接種于96孔板中，siRNA為5pmol/孔、Lipofectamine(R)2000試劑為0.25μ l/孔時，有較高轉染效率(70％)；

4、② Livin特異性siRNA轉染人膀胱癌EJ細胞24h后，干擾組（轉染siRNA）中Livin mRNA的表達較空白對照組及陰性對照組顯著降低(P＜0.01)；③轉染48h后，Livin在蛋白水平的表達，較空白對照組及陰性對照組明顯下調(P＜0.01)；④經CCK-8檢測發(fā)現(xiàn)，Livin siRNA干擾組、THP化療組及干擾+化療的聯(lián)合作用組均可抑制EJ細胞的增殖。且聯(lián)合作用組對細胞的增殖抑制率顯著高于單獨干擾組及單獨化療作用組(P＜

5、0.01)；⑤流式細胞術的檢測結果顯示，與空白對照組比較，干擾組、化療組及聯(lián)合作用組均可促使膀胱癌EJ細胞的凋亡，且聯(lián)合作用組的細胞凋亡率顯著高于單獨干擾組及單獨化療作用組(P＜0.01)。
　　結論：⑴Livin基因在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到一定的促進作用；⑵本實驗設計的Livin特異性siRNA能夠有效抑制人膀胱癌EJ細胞中Livin基因的表達；⑶通過抑制Livin基因的表達，可有效抑制人膀胱癌EJ細胞的增殖、并促進其凋亡；