七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移能力及化療敏感性的影響.pdf

1、肺癌是當(dāng)今世界各國常見的呼吸道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)上升趨勢(shì)。肺癌的病理分類中，75％～85％為非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)，治療方法以手術(shù)切除為主，但腫瘤在術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是肺癌患者死亡的主要原因。19世紀(jì)80年代，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)手術(shù)可促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移能力，并注意到腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。近年來，人們逐漸認(rèn)識(shí)到麻醉藥物和麻醉方法也可影響到腫瘤患者的術(shù)后轉(zhuǎn)歸和長期預(yù)后。

2、如何在圍術(shù)期抑制腫瘤細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)展和轉(zhuǎn)移是麻醉醫(yī)師面臨的新挑戰(zhàn)，正成為麻醉學(xué)研究的新課題。麻醉醫(yī)師應(yīng)選擇具有抑制腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移能力的麻醉藥或麻醉方法，以降低腫瘤在術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的幾率。
　　 七氟醚是肺癌手術(shù)期間廣泛使用的吸入麻醉藥物，其以氣體形式通過呼吸道進(jìn)入人體內(nèi)發(fā)揮麻醉作用，具有麻醉效能強(qiáng)、可控性高的特點(diǎn)。因此，七氟醚在全身麻醉中，特別是在麻醉維持過程中占據(jù)著重要地位。肺癌手術(shù)時(shí)間相對(duì)較長，患者需長時(shí)間地接受吸入麻醉

3、。七氟醚進(jìn)入呼吸道后，首先與支氣管、肺泡直接接觸，但七氟醚對(duì)肺癌細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移能力及化療敏感性有何影響尚不明確。
　　 腫瘤的生長是一個(gè)多基因、多階段的復(fù)雜過程，其中細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖之間的平衡失調(diào)是腫瘤形成的原因之一。X連鎖凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitorofapoptosisprotein，XIAP)和Survivin屬凋亡抑制蛋白家族（inhibitorofapoptosisproteins，IAPs）成

4、員，在腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡過程中起著重要作用。研究證實(shí)，XIAP和Survivn能直接阻止天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3（cysteinylaspartatespecificprotease-3，Caspase-3）的合成。它們表達(dá)的下調(diào)能促進(jìn)Caspase-3生成，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。Bcl-2和Bax是Bcl-2蛋白家族成員，其中Bcl-2為抗凋亡成員，而Bax為促凋亡成員。Bcl-2和Bax之間的相互作用結(jié)果可決定細(xì)胞是否通過線粒體

5、途徑發(fā)生凋亡。目前，七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及對(duì)上述分子表達(dá)有何影響尚不明確。
　　 腫瘤的生長還與細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制異常有關(guān)。腫瘤屬于一種細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制發(fā)生紊亂的疾病，大多數(shù)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞周期的調(diào)控異常密切相關(guān)。細(xì)胞周期受多種細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)和細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)調(diào)控，其中CyclinA，CyclinB1，Cdc2在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的G2/M

6、期進(jìn)展過程中發(fā)揮著重要作用。上述周期蛋白表達(dá)異常可導(dǎo)致細(xì)胞周期G2/M期調(diào)控失常，使細(xì)胞發(fā)生癌變。目前，七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的細(xì)胞周期及CyclinA，CyclinB1，Cdc2表達(dá)有何影響尚未見報(bào)道。
　　 腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜、持續(xù)、多步驟、多階段的過程。其中，腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力是決定腫瘤細(xì)胞能否發(fā)生轉(zhuǎn)移的兩個(gè)較為重要因素。在腫瘤的基本轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞首先通過膜表面受體粘附于基底膜(basementmemb

7、rane，BM)和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellulamatrix，ECM)成分，然后分泌蛋白水解酶侵襲BM和ECM，最后定向運(yùn)動(dòng)、遷移穿越BM和ECM，并經(jīng)血道和淋巴道向遠(yuǎn)處遷移，在新的位置形成轉(zhuǎn)移灶。MMP(matrixmetalloproteinases，MMP)-2和MMP-9是由腫瘤細(xì)胞分泌的一類能降解BM和ECM的蛋白水解酶，同屬基質(zhì)金屬蛋白酶家族，在腫瘤細(xì)胞侵襲過程中起著關(guān)鍵性作用;腫瘤細(xì)胞表達(dá)的Fascin、Ezrin能

8、促進(jìn)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，與腫瘤細(xì)胞的遷移過程密切相關(guān)。目前，七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力及上述相關(guān)分子的表達(dá)有何影響尚不明確。
　　 p38MAPK(p38mitogen-activatedproteinkinase，p38MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是MAPK家族的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。大量研究證實(shí)，p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與調(diào)控了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。但p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與調(diào)控七氟醚對(duì)A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響，以及是

9、否參與調(diào)控七氟醚對(duì)MMP-2、MMP-9、Fascin、Ezrin表達(dá)的影響尚不明確。
　　 化療已作為常規(guī)方案列入肺癌的綜合治療，對(duì)降低腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的幾率有一定積極意義。近年來，隨著肺癌患者在圍術(shù)期使用鉑類藥物化療愈來愈普遍，麻醉藥物是否會(huì)影響化療藥物的效果也日漸受到關(guān)注。研究表明，七氟醚可減弱順鉑對(duì)艾氏腹水腫瘤細(xì)胞的毒性作用，但七氟醚是否會(huì)影響順鉑對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的抗癌效應(yīng)尚不明確。
　　 本研究采用七氟

10、醚作用于體外培養(yǎng)的人肺腺癌A549細(xì)胞，并對(duì)以下三個(gè)方面進(jìn)行研究:①探討七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生長的影響及有關(guān)分子機(jī)制;②探討七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響及有關(guān)分子機(jī)制;③探討七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞化療敏感性的影響及有關(guān)分子機(jī)制。闡明上述問題將為臨床麻醉工作提供一定指導(dǎo)意義。
　　 第一章:七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及有關(guān)分子表達(dá)的影響
　　 目的:觀察不同濃度七氟醚對(duì)人肺腺癌A54

11、9細(xì)胞增殖、凋亡的影響，并探討有關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法:人肺腺癌A549細(xì)胞接種于培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后，隨機(jī)分為4組:對(duì)照組（C組，0％七氟醚）、1.7％七氟醚組（S1組）、3.4％七氟醚組（S2組）、5.1％七氟醚組（S3組）。S1、S2、S3組的A549細(xì)胞分別用1.7％、3.4％、5.1％七氟醚處理2、4、6h。C組不接受七氟醚處理。四組處理結(jié)束后，繼續(xù)培養(yǎng)48h。于48h時(shí)，采用MTT法、平板克隆實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀分別檢

12、測(cè)各組A549細(xì)胞處理2、4、6h后的增殖抑制率、克隆形成率、凋亡率。免疫印跡法檢測(cè)各組A549細(xì)胞處理4h的XIAP，Survivin，Bcl-2，Bax，Caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，增殖抑制率、克隆形成率、細(xì)胞凋亡率的比較采用兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析。XIAP、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)

13、的組間比較采用單因素方差分析。組間多重比較采用LSD法（方差齊）或Dunnett'sT3法（方差不齊）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組A549細(xì)胞增殖抑制率的比較。經(jīng)析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理濃度各組間增殖抑制率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=128.672，P=0.000)。七氟醚處理時(shí)間各組間增殖抑制率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=135.426，P=0.000）。七氟醚處理濃度與七氟醚處理時(shí)間這兩個(gè)

14、因素?zé)o交互效應(yīng)(F=1.854，P=0.135)。各個(gè)處理時(shí)間的S2、S3組增殖抑制率均高于S1組(P＜0.05)，其中S3組＞S2組(P＜0.05)。S1、S2、S3組處理6h的增殖抑制率＞處理4h的增殖抑制率＞處理2h的增殖抑制率(P＜0.05)。C組各個(gè)處理時(shí)間的A549細(xì)胞增殖抑制率均為0。
　　 2.各組A549細(xì)胞克隆形成率的比較。經(jīng)析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理濃度各組間克隆形成率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=400.176，

15、P=0.000)。七氟醚處理時(shí)間各組間克隆形成率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=65.728，P=0.000)。七氟醚處理濃度與七氟醚處理時(shí)間這兩個(gè)因素存在交互效應(yīng)(F=6.081，P=0.000)。七氟醚處理濃度的單獨(dú)效應(yīng)分析顯示:與C組比較，各個(gè)處理時(shí)間的S1、S2、S3組克隆形成率依次降低(P＜0.05);七氟醚處理時(shí)間的單獨(dú)效應(yīng)分析顯示:S1、S2、S3組處理6h的克隆形成率＜處理4h的克隆形成率＜處理2h的克隆形成率(P＜0.05)，

16、C組各個(gè)處理時(shí)間的克隆形成率比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　 3.各組A549細(xì)胞凋亡率的比較。經(jīng)析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理濃度各組間凋亡率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=278.064，P=0.000)。七氟醚處理時(shí)間各組間凋亡率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=94.230，P=0.000)。七氟醚處理濃度與七氟醚處理時(shí)間這兩個(gè)因素存在交互效應(yīng)(F=11.440，P=0.000)。七氟醚處理濃度的單獨(dú)效應(yīng)分析顯示:與C組比較，各個(gè)處理時(shí)間

17、的S1、S2、S3組細(xì)胞凋亡率均依次增加（P＜0.05）;七氟醚處理時(shí)間的單獨(dú)效應(yīng)分析顯示:S1、S2、S3組處理6h的細(xì)胞凋亡率＞處理4h的細(xì)胞凋亡率＞處理2h的細(xì)胞凋亡率(P＜0.05)，C組各個(gè)處理時(shí)間的細(xì)胞凋亡率比較無顯著差異（P＞0.05）。
　　 4.各組A549細(xì)胞XIAP，Survivin，CleavedCaspase-3蛋白表達(dá)水平的比較。與C組比較，S1、S2、S3組XIAP，Survivin蛋白表達(dá)依次下調(diào)

18、(P＜0.05)。與C組比較，S1、S2、S3組CleavedCaspase-3蛋白表達(dá)依次上調(diào)(P＜0.05)。
　　 5.各組A549細(xì)胞Bcl-2，Bax蛋白表達(dá)水平的比較。與C組比較，S1、S2、S3組Bcl-2，Bax蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:七氟醚能抑制A549細(xì)胞增殖，促進(jìn)A549細(xì)胞凋亡。該效應(yīng)與下調(diào)XIAP、Survivin蛋白表達(dá)，上調(diào)CleavedCaspase-3蛋白表達(dá)

19、有關(guān)。
　　 第二章:七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的細(xì)胞周期及有關(guān)分子表達(dá)的影響
　　 目的:觀察不同濃度七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的細(xì)胞周期影響，并探討有關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法:人肺腺癌A549細(xì)胞接種于培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后，隨機(jī)分為對(duì)照組（C組，0％七氟醚）、1.7％七氟醚組（S1組）、3.4％七氟醚組（S2組）、5.1％七氟醚組（S3組）。S1、S2、S3組的A549細(xì)胞分別用1.7％、3.4％、5.1

20、％七氟醚處理4h。C組不接受七氟醚處理。四組處理結(jié)束后，繼續(xù)培養(yǎng)48h。于48h時(shí)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組A549細(xì)胞的細(xì)胞周期比例變化。免疫印跡法檢測(cè)各組A549細(xì)胞處理4h后的CyclinA，CyclinB1，Cdc2蛋白的表達(dá)水平。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。組間多重比較采用LSD法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

21、　　 結(jié)果:
　　 1.各組A549細(xì)胞的細(xì)胞周期變化的比較。與C組比較，S1、S2、S3組G0/G1期細(xì)胞比例依次降低(P＜0.05)，S期和G2/M期細(xì)胞比例依次增加(P＜0.05)。
　　 2.各組A549細(xì)胞CyclinA，CyclinB1，Cdc2蛋白表達(dá)水平的比較。與C組比較，S1、S2、S3組CyclinA，CyclinB1，Cdc2蛋白表達(dá)依次下調(diào)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:七氟醚阻滯A54

22、9細(xì)胞的細(xì)胞周期于G2/M期，該效應(yīng)與下調(diào)CyclinA，CyclinB1，Cdc2蛋白表達(dá)有關(guān)。
　　 第三章:七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力及有關(guān)分子表達(dá)的影響
　　 目的:觀察不同濃度七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響，并探討有關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法:人肺腺癌A549細(xì)胞接種于培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后，隨機(jī)分為4組:對(duì)照組（C組，0％七氟醚）、1.7％七氟醚組（S1組）、3.4％七氟醚組（S2組

23、）、5.1％七氟醚組（S3組）。S1、S2、S3組的A549細(xì)胞分別用1.7％、3.4％、5.1％七氟醚處理2、4、6h。C組不接受七氟醚處理。四組處理結(jié)束后，繼續(xù)培養(yǎng)24h。于24h時(shí)，采用Transwell法檢測(cè)各組細(xì)胞處理2、4、6h后的侵襲細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞處理4h后的細(xì)胞遷移率變化，RT-PCR和免疫印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞處理4h后MMP-2、MMP-9、Fascin、Ezrin的mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　

24、 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，侵襲細(xì)胞數(shù)的比較采用兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析。細(xì)胞遷移率、MMP-2、MMP-9、Ezrin、FascinmRNA和蛋白表達(dá)的組間比較采用單因素方差分析。組間多重比較采用LSD法（方差齊）或Dunnett'sT3法（方差不齊）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組A549細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)的比較。經(jīng)析因分析

25、發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理濃度各組間侵襲細(xì)胞數(shù)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=241.554，P=0.000)。七氟醚處理時(shí)間各組間侵襲細(xì)胞數(shù)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=31.188，P=0.000)。七氟醚處理濃度與七氟醚處理時(shí)間這兩個(gè)因素存在交互效應(yīng)(F=3.801，P=0.003)。七氟醚處理濃度的單獨(dú)效應(yīng)分析顯示:與C組比較，各個(gè)處理時(shí)間的S1、S2、S3組侵襲細(xì)胞數(shù)依次減少(P＜0.05);七氟醚處理時(shí)間的單獨(dú)效應(yīng)分析顯示:S1、S2、S3組處理6

26、h的侵襲細(xì)胞數(shù)＜處理4h的侵襲細(xì)胞數(shù)＜處理2h的侵襲細(xì)胞數(shù)（P＜0.05），C組各個(gè)處理時(shí)間的侵襲細(xì)胞數(shù)比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　 2.各組A549細(xì)胞MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)水平的比較。與C組比較，S1、S2、S3組MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)依次下調(diào)(P＜0.05)。
　　 3.各組A549細(xì)胞遷移率的比較。與C組比較，S1組細(xì)胞遷移率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.134)。與C組比較

27、，S2、S3組細(xì)胞遷移率依次降低(P＜0.05)。
　　 4.各組A549細(xì)胞Fascin、EzrinmRNA和蛋白表達(dá)水平的比較。與C組比較，S1、S2、S3組Fascin、EzrinmRNA和蛋白表達(dá)依次下調(diào)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:七氟醚能抑制A549細(xì)胞侵襲，該效應(yīng)與下調(diào)MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)有關(guān);七氟醚能抑制A549細(xì)胞遷移，該效應(yīng)與下調(diào)Fascin、EzrinmRNA和蛋白表達(dá)有關(guān)。<

28、br>　　 第四章:p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在七氟醚抑制人肺腺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力中的作用
　　 目的:探討七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的抑制作用是否與p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。
　　 方法:人肺腺癌A549細(xì)胞接種于培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后A549細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組（C組）、3.4％七氟醚組（Sev組）、3.4％七氟醚+SB203580組(Sev+SB組)、SB203580組（SB組）。Sev組暴露于3

29、.4％七氟醚4h。Sev+SB組先與20μMSB203580孵育，隨后暴露于3.4％七氟醚4h。SB組用SB203580處理。C組不接受七氟醚和SB203580處理。四組處理結(jié)束后，繼續(xù)培養(yǎng)24h。于24h時(shí)，采用Transwell法檢測(cè)各組細(xì)胞處理后的侵襲細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞處理后的細(xì)胞遷移率變化，蛋白印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞處理后p38MAPK、p-p38MAPK、MMP-2、MMP-9、Ezrin、Fascin的蛋白表達(dá)水平

30、。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。組間比較采用兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析，組間多重比較采用LSD法（方差齊）或Dunnett'sT3法（方差不齊）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組A549細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)的比較。析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(F=87.188，P=0.000)。SB203580處理后侵襲細(xì)胞

31、數(shù)目顯著減少(F=124.866，P=0.000)。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=15.840，P=0.001)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、SB組侵襲細(xì)胞數(shù)目顯著減少(P＜0.05)。Sev+SB組侵襲細(xì)胞數(shù)目顯著低于其他3組（P＜0.05）。
　　 2.各組A549細(xì)胞遷移率的比較。析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后細(xì)胞遷移率顯著降低（F=79.419，P=0.000）。SB203580處

32、理后細(xì)胞遷移率顯著降低（F=84.304，P=0.000）。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=33.305，P=0.000)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、SB組的細(xì)胞遷移率顯著降低(P＜0.05)。Sev+SB組的細(xì)胞遷移率顯著低于其他3組(P＜0.05)。
　　 3.各組A549細(xì)胞p38MAPK磷酸化水平的比較。析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后p38MAPK磷酸化水平顯著降低(F=51.12

33、4，P=0.000)。SB203580處理后p38MAPK磷酸化水平顯著降低(F=82.749，P=0.000)。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)（F=5.463，P=0.03）。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、SB組p38MAPK磷酸化水平顯著降低(P＜0.05)。Sev+SB組p38MAPK磷酸化水平顯著低于其他3組(P＜0.05)。
　　 4.各組A549細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的

34、比較。MMP-2蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后MMP-2表達(dá)顯著下調(diào)(F=103.042，P=0.000)。SB203580處理后MMP-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=243.337，P=0.000)。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=5.656，P=0.027)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、SB組MMP-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)。Sev+SB組MMP-2蛋白表達(dá)顯著低于其他3組(P

35、＜0.05);MMP-9蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后MMP-9蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（F=88.369，P=0.000）。SB203580處理后MMP-9蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=271.388，P=0.000)。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=5.968，P=0.024)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、SB組MMP-9蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)。Sev+SB組MMP-9蛋白表達(dá)顯著低于其

36、他3組（P＜0.05）。
　　 5.各組A549細(xì)胞Fascin、Ezrin蛋白表達(dá)的比較。Fascin蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后Fascin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=104.422，P=0.000)。SB203580處理后Fascin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=364.239，P=0.000)。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=10.168，P=0.005)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev

37、組、SB組Fascin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)。Sev+SB組Fascin蛋白表達(dá)顯著低于其他3組(P＜0.05);Ezrin蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后Ezrin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=78.411，P=0.000)。SB203580處理后Ezrin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（F=169.365，P=0.000）。七氟醚和SB203580這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=21.122，P=0.000)。單向方差分析顯示:與

38、C組比較，Sev組、SB組Ezrin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)。Sev+SB組Ezrin蛋白表達(dá)顯著低于其他3組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:七氟醚抑制A549細(xì)胞侵襲和遷移的作用可能與抑制p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。
　　 第五章:七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞化療敏感性的影響
　　 目的:觀察七氟醚對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞化療敏感性的影響及探討有關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法:人肺腺癌A549細(xì)胞接

39、種于培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后A549細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組（C組）、2.5％七氟醚組（Sev組）、順鉑組（DDP組）、2.5％七氟醚+順鉑組（Sev+DDP組）。Sev組暴露于2.5％七氟醚4h，DDP組接受終濃度為10μmol/L順鉑的處理。Sev+DDP組A549細(xì)胞加入終濃度為10μmol/L順鉑，再暴露于2.5％七氟醚4h。C組不接受七氟醚和DDP處理。四組處理結(jié)束后，繼續(xù)培養(yǎng)24h。于24h時(shí)，采用Transwell法檢測(cè)各組細(xì)胞處理

40、后的侵襲細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞處理后的細(xì)胞遷移率變化，蛋白印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞處理后MMP-2、MMP-9、Ezrin、Fascin蛋白表達(dá)水平。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。組間比較采用兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析，組間多重比較采用LSD法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組A549細(xì)胞侵襲數(shù)的比較。析因分析發(fā)現(xiàn)

41、，七氟醚處理后侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(F=80.695，P=0.000)。DDP處理后侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少（F=127.681，P=0.000）。七氟醚和DDP這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)（F=7.871，P=0.011）。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、DDP組侵襲細(xì)胞數(shù)目顯著減少(P＜0.05)。Sev+DDP組侵襲細(xì)胞數(shù)目顯著低于其他3組(P＜0.05)。
　　 2.各組A549細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)的變化。

42、MMP-2蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后MMP-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=68.510，P=0.000)。DDP處理后MMP-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=205.571，P=0.000)。七氟醚和DDP這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=8.351，P=0.009)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、DDP組MMP-2蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。Sev+DDP組MMP-2蛋白表達(dá)顯著低于其他3組(P＜0.05);MMP-9

43、蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后MMP-9蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=86.277，P=0.000)。DDP處理后MMP-9蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=365.709，P=0.000)。七氟醚和DDP這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=18.754，P=0.000)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、DDP組MMP-9蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。Sev+DDP組MMP-9蛋白表達(dá)顯著低于其他3組。
　　 3.各組A549細(xì)

44、胞遷移率的比較。析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后細(xì)胞遷移率顯著降低(F=133.671，P=0.000)。DDP處理后細(xì)胞遷移率顯著降低(F=209.764，P=0.000)。七氟醚和DDP這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)（F=54.888，P=0.000）。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、DDP組的細(xì)胞遷移率顯著降低(P＜0.05)。Sev+DDP組的細(xì)胞遷移率顯著低于其他3組(P＜0.05)。
　　 4.各組A549細(xì)胞E

45、zrin、Fascin蛋白表達(dá)的變化。Ezrin蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后Ezrin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=74.205，P=0.000)。DDP處理后Ezrin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=282.359，P=0.000)。七氟醚和DDP這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=9.516，P=0.006)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、DDP組Ezrin蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。Sev+DDP組Ezrin蛋白表達(dá)顯著低

46、于其他3組(P＜0.05);Fascin蛋白表達(dá)比較:析因分析發(fā)現(xiàn)，七氟醚處理后Fascin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=128.451，P=0.000)。DDP處理后Fascin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(F=603.874，P=0.000)。七氟醚和DDP這兩個(gè)處理因素之間存在著交互效應(yīng)(F=52.328，P=0.000)。單向方差分析顯示:與C組比較，Sev組、DDP組Fascin蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。Sev+DDP組Fascin蛋白表達(dá)顯