草魚不同群體（雌核發(fā)育、ENU誘變）的微衛(wèi)星遺傳結(jié)構(gòu)分析及生長差異研究.pdf

1、草魚(Cetpharyngodon idellus)為我國特有的淡水養(yǎng)殖品種，在養(yǎng)殖魚類中占有重要的經(jīng)濟地位。由于草魚繁殖周期長，親魚個體大等原因，給應用傳統(tǒng)選育方法育出優(yōu)良品種造成一定的難度，目前草魚尚無國家審定的良種。雌核發(fā)育為快速建立純系的有效途徑，利用微衛(wèi)星標記對雌核發(fā)育后代的遺傳多樣性進行評估，在生產(chǎn)性能優(yōu)良的長江水系草魚的基礎(chǔ)上進行良種選育可能是一種可行的方法。基于本實驗室建立6齡ENU誘變草魚群體，挑選4對優(yōu)良親本建立家系

2、，經(jīng)過生長性狀對比篩選出具有明顯生長差異的兩個家系進行mstn1、mstn2基因的SNP研究，以期篩選出ENU誘變草魚群體生長改良研究提供候選分子標記，進一步確定ENU誘變草魚群體分子標記輔助育種方案。具體研究如下：
　?。?）以紫外線滅活的團頭魴（Megalobrama amblycephala）精子激活草魚卵子，冷休克抑制第二極體排出的方法誘導出長江水系優(yōu)良F2代草魚減數(shù)雌核發(fā)育子代。在后代中不僅存在雌核發(fā)育后代，還存在草魴雜

3、交后代，雌核發(fā)育后代的體型與草魚一致，而草魴雜交后代的體型介于草魚與團頭魴之間。Partec CyFlow倍性分析儀測定結(jié)果顯示：普通草魚與雌核發(fā)育草魚的相對DNA含量分別為23.01和22.72，二者的DNA含量接近；而高體型子代的相對DNA含量為25.38，介于草魚與團頭魴（DNA含量28.21）之間，屬于草魴雜交后代。選取17個微衛(wèi)星標記對草魚群體、雌核發(fā)育草魚群體和草魴雜交后代的遺傳多樣性進行了檢測，共檢測出59個等位基因，其中

4、43.18個有效等位基因。草魚對照群體、草魴雜交后代和雌核發(fā)育草魚群體的平均等位基因依次為3.57、2.86和2.79，平均有效等位基因依次為2.93、2.37和1.96，平均期望雜合度在依次為0.6502、0.5573和0.3775，多態(tài)信息含量(PIC)平均值依次為0.5738、0.4649和0.3791。與草魚對照群體相比，雌核發(fā)育草魚群體的遺傳多樣性顯著下降，表明通過減數(shù)雌核發(fā)育方法可獲得純合性較高的草魚個體。構(gòu)建了草魚后代不同

5、群體的DNA指紋模式圖，篩選到不同群體的9個特異微衛(wèi)星標記，為草魚優(yōu)良群體的選育奠定基礎(chǔ)。
　?。?）為了獲得雌核發(fā)育ENU誘變草魚群體的相關(guān)遺傳參數(shù)，實驗采用Partec CyFlow倍性分析儀測定ENU誘變草魚群體（Q群體）和雌核發(fā)育ENU誘變草魚群體（E群體）相對DNA含量分別為24.02和23.80，二者的DNA含量接近，均為二倍體。選取28個微衛(wèi)星標記對Q群體和 E群體多樣性進行了檢測。結(jié)果表明，E群體和Q群體的平均等位

6、基因分別為3.7143、5.1786，平均有效等位基因分別為2.1857、4.0028，平均期望純合度分別為0.5122、0.2814，平均期望雜合度分別為0.4878、0.7186，多態(tài)信息含量(PIC)平均值分別為0.4282、0.6606。從個體在微衛(wèi)星位點的純合率分析，在E群體中，每個個體的純合度均小于1.00，說明沒有完全純合的個體。從每個微衛(wèi)星位點在群體的純合率分析，除了微衛(wèi)星位點5476，HLJC118和HLJC81外，其

7、他位點的純合度以不同的速率得到明顯的提高。研究結(jié)果表明經(jīng)過減數(shù)雌核發(fā)育方法，ENU誘變草魚群體的各微衛(wèi)星位點的純合度以不同的速率得到提升，遺傳多樣性明顯降低，此方法可以獲得純合度較高的雌核發(fā)育ENU誘變草魚個體，為ENU誘變草魚良種選育提供重要遺傳數(shù)據(jù)資料。
　　（3）對4個ENU誘變草魚家系進行生長對比，經(jīng)過175天養(yǎng)殖，從4個家系的生長對比發(fā)現(xiàn)，從體重增長量的角度看，家系1和家系4相對于其他2個家系有明顯的優(yōu)勢，從體重增重率來

8、看，家系4和家系2相對于其他2個家系存在明顯優(yōu)勢，綜合來看家系4的優(yōu)勢最明顯，家系3明顯弱于其他3個家系。家系4的8個性狀明顯大于其他3個家系；家系1的體高、頭長略大于家系2，其他的6個性狀明顯大于家系2和家系3；家系2的8個性狀明顯大于家系3。采用偏相關(guān)分析各個形態(tài)性狀與體重的相關(guān)程度得出：家系1中有全長、體長、尾柄長、體厚，相關(guān)系數(shù)依次為0.357、0.619、0.608、0.396；家系2中有全長、體長、頭長、體厚，相關(guān)系數(shù)依次為

9、0.348、0.360、0.687、-0.384；家系3中有全長、體長、尾柄長、尾柄高，相關(guān)系數(shù)依次為0.529、0.449、-0.351、0.384；家系4中有全長、體長、體厚，相關(guān)系數(shù)依次為0.629、0.543、0.590，經(jīng)過因子分析可以明顯區(qū)分家系4與其他3個家系，以上統(tǒng)計方法可總結(jié)出家系4和家系3具有明顯的生長差異，運用雙向測序法對MSTN1、MSTN2基因在家系3、4中進行SNP位點篩選，對于MSTN1，家系3在465 n