CTLA-4Ig或抗CD40L單抗體外誘導(dǎo)再生障礙性貧血T細(xì)胞免疫無(wú)能和促進(jìn)造血恢復(fù)的研究.pdf

1、再生障礙性貧血(簡(jiǎn)稱(chēng)再障)是一種異質(zhì)性疾病，是由多種病因引起的骨髓造血功能衰竭，臨床表現(xiàn)為全血細(xì)胞減少。再障的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及造血干細(xì)胞損傷，免疫異常，造血微環(huán)境改變等因素。目前多數(shù)研究認(rèn)為，原發(fā)性再障的主要發(fā)病機(jī)制是T細(xì)胞介導(dǎo)的骨髓特異性的自身免疫反應(yīng)，免疫抑制治療則是目前臨床治療再障的主要手段。 再障的干細(xì)胞抗原性研究較少，已發(fā)現(xiàn)的可能與再障發(fā)病有關(guān)的自身抗原包括：地西泮結(jié)合抑制物相關(guān)蛋白(DRS-1)和抗驅(qū)動(dòng)素(anti

2、-kinetin)等，對(duì)其與再障發(fā)病相關(guān)性的研究還在進(jìn)行中。更多的研究主要是集中在T細(xì)胞免疫方面，免疫抑制治療針對(duì)的也主要是T細(xì)胞免疫的抑制?？乖禺愋缘腡細(xì)胞活化過(guò)程中需要抗原信號(hào)和共刺激信號(hào)分子的雙重作用，阻斷共刺激信號(hào)可誘導(dǎo)抗原特異性的T細(xì)胞免疫無(wú)能。共刺激阻斷劑用于移植耐受、自身免疫性疾病等的治療，在體內(nèi)、外試驗(yàn)中已經(jīng)取得比較肯定的療效。 在前期關(guān)于再障T細(xì)胞早期激活及共刺激信號(hào)分子檢測(cè)等研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究用共刺激

3、信號(hào)相關(guān)分子CTLA-4Ig、抗CD40LmAb誘導(dǎo)再障患者骨髓T細(xì)胞免疫無(wú)能和促進(jìn)造血的情況，一方面加深對(duì)再障免疫發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)；另一方面，為探討上述分子作為免疫調(diào)節(jié)劑治療再障的潛能提供實(shí)驗(yàn)室研究資料。主要內(nèi)容包括運(yùn)用流式細(xì)胞分析和甲基纖維素體外半固體培養(yǎng)法，研究CTLA-4Ig/抗CD40LmAb對(duì)骨髓T細(xì)胞體外增殖、活化及骨髓單個(gè)核細(xì)胞集落形成的影響。 第一部分CTLA-4Ig或抗-CD40L單抗體外誘導(dǎo)再障患者T淋巴細(xì)胞

4、免疫無(wú)能的研究 目的：CTLA-4Ig和抗-CD40ImAb分別與B7和CD40l結(jié)合，抑制T細(xì)胞發(fā)揮效應(yīng)所必需的共刺激信號(hào)的作用，從而誘導(dǎo)T細(xì)胞無(wú)能。細(xì)胞免疫異常是再障患者免疫發(fā)病機(jī)制的主要方面，因此我們主要通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的方法，觀察CTlA-4Ig/抗-CD40LmAb作用前后骨髓T細(xì)胞表型的變化，從而研究CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb對(duì)再障骨髓T細(xì)胞數(shù)量、亞群及活化狀態(tài)的影響，初步判斷共刺激阻斷對(duì)糾正再障異常細(xì)胞免

5、疫的可能作用。 結(jié)論： 1.CLTA-4Ig及抗-CD40LmAb(4F1)能夠抑制再障患者骨髓T淋巴細(xì)胞的異常活化、增殖。 2.CLTA-4Ig及抗-CD40LmAb(4F1)對(duì)重型再障的抑制作用高于非重型再障，對(duì)CD4<'+>細(xì)胞的抑制作用高于CD8<'+>細(xì)胞。 3.CLTA-4Ig較抗-CD40LmAb(4F1)，對(duì)再障T淋巴細(xì)胞異常增殖、活化的抑制作用更為明顯。 第二部分CTLA-4Ig

6、或抗-CD40L單抗促進(jìn)再障患者骨髓造血恢復(fù)的研究 目的：干細(xì)胞損傷是再障的主要病理生理學(xué)改變，臨床表現(xiàn)為全血細(xì)胞減少，體外試驗(yàn)表現(xiàn)為骨髓造血前體細(xì)胞減少，CD34<'+>細(xì)胞比值減低，體外集落培養(yǎng)多系細(xì)胞集落生成減少，對(duì)造血刺激因子的反應(yīng)低下。集落培養(yǎng)是研究再障骨髓造血前體細(xì)胞增殖、分化能力的一種直觀的方法。我們通過(guò)觀察甲基纖維素半固體培養(yǎng)體系中，CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb對(duì)再障和正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞GM-CsF形成

7、的影響，初步判斷CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb對(duì)再障骨髓造血的可能影響。 結(jié)論： 1．再障患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞體外集落、集簇生成均較正常組明顯減低，以SAA組減低更為明顯。 2．CTLA-4Ig和抗-CD40LmAb均能夠在體外促進(jìn)再障患者的GM-CFU形成，且二者對(duì)SAA的作用較NSAA更為明顯。 3．CTLA-4Ig/抗-CD40LmAb在甲基纖維素半固體培養(yǎng)體系內(nèi)并不影響正常骨髓的GM-CFU