海洋真菌化合物STb對GH3細胞的毒性作用及其相關(guān)機制的體外研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開： 第一部分抗垂體腺瘤候選化合物的初篩 目的：垂體腺瘤是人體內(nèi)常見的內(nèi)分泌腫瘤，長期以來由于治療藥物有限以及耐藥現(xiàn)象的不斷發(fā)生，其治療效果常常不能使醫(yī)生和患者滿意，因而臨床迫切需要高效低毒的新藥誕生。天然產(chǎn)物一直是創(chuàng)新藥物的一個重要來源，海洋微生物化合物的研究引起了越來越多的重視。我們從我國南海紅樹林真菌天然產(chǎn)物庫中篩選出具有抗垂體腺瘤活性的化合物作為抗垂體腺瘤藥物的候選化合物。 方法：我

2、們選擇大鼠垂體瘤GH3細胞作為垂體腺瘤的體外篩選模型，對中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院從我國南海紅樹林真菌代謝產(chǎn)物中提取的16種未知化合物進行抗垂體腺瘤作用的篩選。以100uM的高濃度為篩選濃度處理GH3細胞48h，通過MTT比色法(3-(4，5-Dimethylthiazol—2-yl)—2，5-diphenyltetrazolium bromide)觀察細胞的增殖狀況，對照為含0.1％DMSO的不加藥組，通過與對照組比較選擇能夠明顯抑制細胞

3、增殖的化合物為抗垂體腺瘤候選化合物。 結(jié)果：通過MTT法對一系列海洋化合物抗垂體腺瘤增殖作用進行篩選，結(jié)果顯示16種化合物中有15種對GH3細胞增殖狀況無明顯作用，僅一種代號為STb的化合物在100uM處理48h可明顯殺傷GH3細胞，與對照組相比其抑制率幾乎可達到100％。 結(jié)論：絕大多數(shù)海洋真菌活性產(chǎn)物對垂體腺瘤GH3細胞的生長無明顯抑制作用，僅有個別化合物對GH3細胞具有明顯的抑制作用。STb是一種活性較好的抑制垂體

4、腺瘤增殖的海洋真菌化合物，我們將其納入抗垂體腺瘤候選化合物并對其進行進一步的藥理及機制的研究。 第二部分 STb對垂體腺瘤GH3細胞的毒性作用及機制探討 目的：研究海洋真菌化合物STb對大鼠垂體瘤細胞系(GH3細胞系)的毒性作用和激素表達水平的影響并對其機制進行初步探討，期望可以找到具有治療垂體腺瘤的潛力的新化合物。 方法：我們通過MTT法用不同濃度的STb(4，2，1，0.5，0.25，0.125uM)處理GH

5、3細胞48h，觀察其抑制GH3細胞的濃度依賴性并計算STb的IC50。同時我們還用MTT法觀察了高、中、低三組濃度(0.6，0.3，0.2uM)的STb處理GH3細胞7天的時間依賴性。根據(jù)STb的時間、濃度依賴性以及IC50，我們選擇最佳濃度為0.3uM進行進一步機制的探討。用Tunel法和流式細胞術(shù)檢測不同時間點GH3細胞的凋亡情況以及隨著作用時間的延長GH3細胞的細胞周期的變化情況，并用Caspase抑制劑Z—VAD—FMK預(yù)處理G

6、H3細胞，觀察caspase通路在細胞凋亡中的作用。用Western—blot法和RT—PCR法檢測STb對GH3細胞生長激素表達水平的影響。 結(jié)果：STb對GH3細胞的抑制作用具有時間、濃度依賴性，隨著濃度和時間的延長細胞死亡率明顯增加，細胞死亡以凋亡為主且有明顯的細胞周期G1/S期阻滯作用，Caspase抑制劑Z—VAD—FMK可部分減輕STb對GH3細胞的促凋亡作用，提示STb對GH3細胞的促凋亡作用可能與caspase相

7、關(guān)蛋白激活有關(guān)；STb在殺傷GH3細胞的同時可明顯抑制細胞內(nèi)的生長激素的水平，但未見細胞內(nèi)GH mRNA水平發(fā)生明顯變化，提示STb作用靶點可能在翻譯及翻譯后修飾階段。 結(jié)論：STb可能通過促進細胞凋亡和細胞周期阻滯的機制抑制GH3細胞增殖，其凋亡發(fā)生與激活caspase相關(guān)蛋白有關(guān)。STb可有效的抑制GH3細胞內(nèi)生長激素的水平但GH mRNA表達水平未見明顯變化，表明STb未從基因水平降低激素表達，其可能通過作用于翻譯或翻譯后