化合物CHO3抗神經(jīng)炎癥作用及其相關(guān)機制研究.pdf

1、神經(jīng)退行性疾病是醫(yī)學研究領(lǐng)域中的一大難題。研究發(fā)現(xiàn),炎癥反應、氧化應激、線粒體機能障礙、興奮性毒性及細胞凋亡等機理在神經(jīng)細胞死亡過程中起重要作用。這些研究結(jié)果為我們尋找神經(jīng)退行性疾病的防治藥物提供了分析的途徑和作用靶點。通過這些研究很有可能找到治療神經(jīng)退行性疾病的新型藥物。
　　 CH03是中國醫(yī)學科學院藥物研究所合成的全新結(jié)構(gòu)小分子化合物,自主知識產(chǎn)權(quán)專利正在申請中。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)CH03對多種誘導劑(神經(jīng)退行性疾病相關(guān)

2、)所致神經(jīng)細胞損傷均具保護作用,并且發(fā)現(xiàn)其對H2O2損傷神經(jīng)細胞的保護作用最為明顯,所以推測其發(fā)揮作用可能與抗炎、抗氧化有關(guān)。
　　 因此,本課題擬在前期研究基礎(chǔ)上,進一步探討CH03對其它誘導劑所致神經(jīng)元損傷的影響,及其抗炎作用和相關(guān)機制。本研究主要分為以下兩部分內(nèi)容:
　　 1.化合物CH03的神經(jīng)保護作用研究
　　 方法：在體外采用去血清、低糖低氧、AB25-35、谷氨酸損傷PC12細胞,考察CH03對其保

3、護作用；在體內(nèi)采用東莨菪堿誘導小鼠學習記憶障礙,通過避暗實驗、水迷宮實驗檢測CH03對其學習記憶的改善作用。采用免疫印跡檢測小鼠腦皮層組織中Bcl-2、Bax的表達。
　　 結(jié)果：體外研究發(fā)現(xiàn),CH03對去血清、低糖低氧、AB25-35模型PC12細胞具有顯著的保護作用,并具有一定的量效關(guān)系；但CH03對谷氨酸損傷PC12的作用不明顯。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)CH03可顯著降低避暗實驗中逃避潛伏期、減少錯誤次數(shù)；縮短水迷宮實驗中逃避潛伏期、

4、減少錯誤次數(shù),并且CH03明顯增加腦皮層Bcl-2的表達,提示CH03通過保護神經(jīng)細胞而改善小鼠學習記憶障礙。
　　 上述結(jié)果提示,CH03可通過神經(jīng)保護作用而改善學習記憶障礙。
　　 2 CH03抗炎作用及其相關(guān)作用機制研究
　　 方法：抗炎作用:在細胞水平上,采用LPS刺激小膠質(zhì)細胞BV-2,通過形態(tài)觀察、ELISA法、Gress法等多種方法評價CH03抗炎作用。作用機制:采用自由基檢測試劑盒,觀察CH03對

5、自由基的直接清除作用;應用ROS檢測試劑盒檢測CH03對胞內(nèi)ROS的抑制作用；也應用免疫印跡、免疫熒光法觀察CH03對LPS激活BV-2的炎癥信號通路的影響。
　　 結(jié)果：CH03可以顯著減輕LPS所致BV-2細胞的激活,減少炎癥因子TNF-α、IL-1β的釋放,降低NO的釋放等。作用機制研究表明,CH03顯著降低胞內(nèi)ROS水平,CH03顯著抑制LPS誘導的BV-2細胞中炎癥相關(guān)蛋白COX-2、iNOS、IL-6的表達,亦可以抑

6、制IкB、ERK的磷酸化,抑制NF-кB核轉(zhuǎn)位。
　　 上述結(jié)果提示,CH03通過直接清除自由基,通過抑制ERK、NF-кB信號通路的激活,進而抑制炎性蛋白的表達、炎癥因子的釋放,最終達到抗炎作用。
　　 綜上所述,本論文通過體外神經(jīng)細胞保護作用的篩選及體內(nèi)改善認知功能的藥效學作用的評價,發(fā)現(xiàn)CH03具有改善東莨菪堿所致小鼠學習記憶障礙的作用。并且發(fā)現(xiàn)具有抗炎抗氧化的作用,這可能是其保護神經(jīng)元、改善學習記憶障礙的機制之一