腫瘤細胞中microRNA的差異表達及miR-17-5p對ES-2和K562細胞生長的影響.pdf

1、目的：microRNA是一類新發(fā)現(xiàn)的具有調控功能的小RNA分子，通過調節(jié)基因的表達在生物發(fā)育、脂肪代謝、細胞分化、增殖和凋亡等過程中發(fā)揮重要作用。而在人類腫瘤中某些miRNA表達水平異?；虬l(fā)生突變，提示這類小的核酸分子可能發(fā)揮類似癌基因或抑癌基因的作用。本實驗旨在通過微陣列技術分析miRNA在六種類型腫瘤細胞中的表達差異，然后對某一特殊miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中可能功能進行深入研究，為進一步探討miRNA在腫瘤中發(fā)揮的作用及其在朋，瘤治

2、療中的應用提供理論依據(jù)和實驗基礎。 方法： 1．利用miRNA表達譜芯片檢測六種腫瘤細胞株：HeLa、K562、ES-2、MCF-7、HT-29和A549中miRNA表達差異，并用RT-PCR、Northern blot進行驗證。 2．利用反義核酸技術封閉ES-2和K562細胞中高表達的miR-17-5p，利用MTT法和細胞計數(shù)檢測細胞的生長變化。 3．用流式細胞術檢測細胞周期改變，用TUNEL檢測是否引

3、起細胞凋亡。 4．mRNA表達譜芯片檢測封閉miR-17-5p后ES-2細胞mRNA表達水平變化，利用生物信息方法預測miR-17-5p可能的靶基因，分析封閉miRNA后細胞生長變化可能的作用機制。 結果： 1．miRNA表達譜芯片檢測到六種腫瘤細胞中115種miRNA存在明顯差異，91種miRNA沒有明顯差異。其中，miR-21在六種腫瘤細胞表達水平均較高；miR-125b表達水平均較低；miR-17-5p和m

4、iR-20a呈集簇表達，在ES-2細胞中的表達水平高于其它細胞；let-7不同亞型在六種細胞系中表達水平較低；MCF-7和HeLa中miRNA表達譜聚為一類。 2．Northern blot、RT-PCR方法驗證與miRNA表達譜芯片檢測結果基本一致。 3．miR-17-5p被封閉后，ES-2細胞生長受到抑制，TUNEL檢測到細胞發(fā)生凋亡；K562細胞生長受到抑制，F(xiàn)ACS檢測細胞發(fā)生S期阻滯。 4．mRNA表達

5、譜芯片檢測到miR-17-5p被封閉后ES-2細胞內mRNA表達水平發(fā)生變化。其中E2F1、CHAF1A、COX7A2L、HECA、VPS26、YES1是生物信息方法預測到的靶基因，而且表達水平發(fā)生變化。 5．miR-17-5p可能通過負性調控E2F1參與細胞凋亡和細胞周期調控。 結論： 1．不同腫瘤類型中miRNA的表達存在差異。 2．miR-17-5p可能通過調控凋亡或細胞周期等過程參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展