K562細(xì)胞衍生微泡的microRNA表達(dá)譜及在白血病中的作用.pdf

1、背景:微泡(Microvesicles,MVs)是各種內(nèi)源性的細(xì)胞(包括正常細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞)釋放的微顆粒分子。微泡曾經(jīng)被認(rèn)為是沒有生物學(xué)活性的灰塵(dust)。近來研究顯示微泡由激活細(xì)胞或者凋亡細(xì)胞產(chǎn)生,,可以在不同類型的細(xì)胞之間轉(zhuǎn)運生物學(xué)信息。腫瘤細(xì)胞衍生的微泡含有miRNA,包含miRNA的微泡從細(xì)胞膜表面脫落釋放到胞外微環(huán)境中便于細(xì)胞間的相互交流。本研究目的是篩選白血病細(xì)胞衍生的微泡miRNA表達(dá)譜并分析其在白血病中的作

2、用。
　　方法:我們篩選出了K562細(xì)胞衍生的微泡、健康志愿者外周血衍生的微泡以及K562細(xì)胞的miRNA表達(dá)譜。我們采用Agilent human miRNA(v12.0)芯片篩選出微泡和細(xì)胞miRNA表達(dá)譜,并對表達(dá)明顯異常的microRNA進(jìn)行實時定量PCR驗證。對異常表達(dá)的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,并進(jìn)一步進(jìn)行了GO分析、pathway分析和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)整合分析。
　　結(jié)果:(1)我們的研究結(jié)果顯示白血病細(xì)胞衍生的微泡與

3、正常細(xì)胞衍生的微泡miRNA表達(dá)譜有明顯差異性,K562細(xì)胞衍生的微泡表達(dá)23個miRNA,其中16個表達(dá)下調(diào),7個表達(dá)上調(diào)。(2)K562細(xì)胞衍生的微泡與其母細(xì)胞的miRNA表達(dá)譜有差異:77個miRNA僅在K562微泡中表達(dá),122個miRNA僅在K562細(xì)胞中表達(dá),104個miRNA在K562微泡和細(xì)胞中共同表達(dá)。這些結(jié)果提示細(xì)胞將miRNA分選到微泡中的過程是一個選擇性的過程。(3)微泡釋放到白血病微環(huán)境在白血病中具有重要作用,

4、靶基因pathway分析顯示大多數(shù)在微泡中異常表達(dá)的miRNA參與了與白血病相關(guān)的信號通路,尤其是絲裂原蛋白激酶(MAPK)信號通路和p53信號通路。(4)進(jìn)一步實行miRNA基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)整合分析發(fā)現(xiàn)miR-15a/b,miR-16,miR-17以及miR-30家族在MAPK信號通路的調(diào)控中中具有重要作用。(5)K562細(xì)胞為費城染色體陽性的慢性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞系,存在t(9;22)。我們進(jìn)一步分析了異常表達(dá)的miRNA的染色體定位,

5、發(fā)現(xiàn)有8個miRNA(hsa-let-7a,hsa-let-7f,hsa-miR-126,hsa-miR-126*,hsa-miR-23b,hsa-miR-24,hsa-miR-27b和hsa-miR-7)定位于9號染色體,4個miRNA(hsa-let-7b,hsa-miR-1249,hsa-miR-130b和hsa-miR-185)定位于22號染色體,這些miRNA共表達(dá)于K562微泡和細(xì)胞。利用TargetScan5.1軟件,我們