以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針設(shè)計(jì)合成及其在肺癌檢測中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　有機(jī)熒光染料香豆素是作為熒光探針和電致發(fā)光材料的重要熒光染料化合物。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是受體酪氨酸激酶家族中的重要成員之一，埃羅替尼(Erlotinib)是小分子酪氨酸激酶抑制劑，屬于4-氨基喹唑啉類口服型抗腫瘤藥物。主要用于非小細(xì)胞肺癌等的治療，埃羅替尼與表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，E

2、GFR)的酪氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)結(jié)合具有高度特異性和可逆性的特點(diǎn)，肺癌等惡性腫瘤細(xì)胞常伴有EGFR高表達(dá)。循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測是影響患者預(yù)后的重要因素，探討有效的檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞的方法有重要意義。目前，尚未見以埃羅替尼為靶向基團(tuán)制備熒光探針用于識別EGFR高表達(dá)的肺癌細(xì)胞等惡性腫瘤細(xì)胞的熒光探針的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　方法：
　　1.制備香豆酸疊氮化合物和去質(zhì)子埃羅替尼。
　　2.制備以埃羅替尼

3、為靶向基團(tuán)的熒光探針。
　　3.培養(yǎng)EGFR高表達(dá)肺癌A-549細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，培養(yǎng)宮頸癌CaSki、SiHa和C33-A細(xì)胞作為對照組。
　　4.通過倒置熒光顯微鏡觀察以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針對EGFR高表達(dá)肺癌A-549細(xì)胞的識別能力。
　　結(jié)果：
　　1.制備香豆酸疊氮化合物:通過水楊醛與丙二酸二乙酯的活性亞甲基進(jìn)行縮合閉環(huán)反應(yīng)得到香豆素環(huán)，通過柯諾瓦諾格反應(yīng)制備出香豆酸，并經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)對照品確證，產(chǎn)物較純

4、無雜質(zhì)點(diǎn)，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將EDC與香豆酸的羧基加成得到活性中間體后，引入催化劑NHS，將此活性中間體變?yōu)橄鄬Ψ€(wěn)定的活性酯中間體，再經(jīng)3-氨丙基疊氮的氨基進(jìn)攻該活性酯中間體，形成酰胺鍵連接的目標(biāo)產(chǎn)物。
　　2.以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針的制備:香豆酸疊氮化合物和乙炔基埃羅替尼發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng)，得到探針分子。質(zhì)譜圖顯示的質(zhì)荷比為737.34166峰為其分子離子峰，核磁共振氫譜圖確證成功制備了以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針。
　

5、　3.以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針對EGFR高表達(dá)的肺癌A-549細(xì)胞的識別能力:用10μM的以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針對肺癌A-549細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）和CaSki細(xì)胞（對照組）進(jìn)行熒光識別，A-549細(xì)胞和CaSki細(xì)胞中均觀察到強(qiáng)的熒光信號。用較低濃度的1μM的以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針對肺癌A-549細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）和CaSki、C33A、SiHa細(xì)胞（對照組）進(jìn)行熒光識別，A-549細(xì)胞中仍可觀察到強(qiáng)的熒光信號，C33A中

6、可觀察到較弱的熒光信號，而CaSki和SiHa細(xì)胞中幾乎不能觀察到熒光信號。用更低濃度的0.1μM的以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探.針對肺癌A-549細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）和CaSki、C33A、SiHa細(xì)胞（對照組）進(jìn)行熒光識別，A-549細(xì)胞中仍可觀察到強(qiáng)的熒光信號，而CaSki、C33A和SiHa細(xì)胞中幾乎不能觀察到熒光信號。
　　結(jié)論：
　　1.成功制備了以埃羅替尼為靶向基團(tuán)的熒光探針。
　　2.初步證明了以埃羅替尼為靶