布魯氏菌抗原蛋白在煙草中的瞬時(shí)表達(dá).pdf

1、碩士學(xué)位論文論文題目 論文題目：布魯氏菌抗原蛋白在煙草中的瞬時(shí)表達(dá)英文題目 英文題目：Transient Expression of BrucellaAntigen Protein in Tobacco學(xué) 位 類 學(xué) 位 類 別： 理學(xué)碩士研 究 生 姓 研 究 生 姓 名： 廖露 學(xué)號(hào) 學(xué)號(hào)：2014023155學(xué)科 學(xué)科(領(lǐng)域 領(lǐng)域)名稱 名稱： 生物學(xué)指 導(dǎo) 教 指 導(dǎo) 教 師： 王建英 職稱 職稱：教授協(xié)助指導(dǎo)教 協(xié)助指導(dǎo)教師：

2、 師： 王晶妍 職稱： 職稱：講師2017 年 6 月 15 日分類號(hào)： 分類號(hào)： Q7 Q7 密 級(jí)： 級(jí)： 公開 公開U D C ： 學(xué)校代碼： 學(xué)校代碼： 10127 10127內(nèi)蒙古科技大學(xué)碩士學(xué)位論文I摘 要布魯氏菌?。˙rucellosis）是一種由布魯氏菌（Brucella）引起的人獸共患的世界范圍流行性疾病。目前，預(yù)防布魯氏菌病最廣泛應(yīng)用的疫苗為減毒活疫苗，但減毒活疫苗對(duì)接種的動(dòng)物和人可能會(huì)造成感染，而且易發(fā)生返祖現(xiàn)象。

3、基因工程疫苗可以克服這一問題，但普通的基因工程疫苗通常采用注射的方式接種，不能引發(fā)粘膜免疫。轉(zhuǎn)基因植物疫苗則可克服以上缺點(diǎn)，與一般的基因工程疫苗相比，轉(zhuǎn)基因植物疫苗成本低，更安全，而且還能使機(jī)體產(chǎn)生粘膜免疫。為構(gòu)建植物疫苗做準(zhǔn)備，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了布菌抗原蛋白基因在煙草中的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)，并快速高效檢測(cè)布菌抗原蛋白是否在植物中表達(dá)，此實(shí)驗(yàn)建立的布菌抗原蛋白基因植物細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)對(duì)后續(xù)研究轉(zhuǎn)布菌抗原基因植物疫苗奠定了重要的基礎(chǔ)。具體內(nèi)容如下：1

4、. 分別以布菌基因組和含有布菌融合抗原基因的質(zhì)粒 pJG045-Omp3148-74-BLS 為模板，經(jīng) PCR 擴(kuò)增得到 Omp10、Omp28、Omp3148-74-BLS 基因片段，采用無需限制性構(gòu)建無縫質(zhì)粒載體的方法，成功構(gòu)建了含 Omp10、Omp28、Omp3148-74-BLS 布菌抗原基因的 pET28a 原核表達(dá)載體。經(jīng) PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定正確后，IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)布菌抗原蛋白。SDS-PAGE 電泳結(jié)果顯示：I

5、PTG 誘導(dǎo)表達(dá)出的 3 種布菌抗原基因的蛋白條帶，與實(shí)際目的蛋白大小相符。2. 誘導(dǎo)后的含重組質(zhì)粒 pET28a-Omp3148-74-BLS 的 TL129 菌體經(jīng)超聲波處理和破碎包涵體處理，用 NI-IDA 瓊脂糖親和層析柱法純化了目的蛋白，用純化后的目的蛋白免疫家兔，得到兔抗布菌抗原蛋白的抗血清，獲取的抗血清通過 Western blot 和間接ELISA 實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其免疫效果。結(jié)果顯示：所制備的多克隆抗體能特異性識(shí)別融合蛋白Om

6、p3148-74-BLS，而未免疫兔的血清并不與融合蛋白產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，表明目的蛋白對(duì)動(dòng)物具有良好的抗原特異性。3. 將 PCR 擴(kuò)增得到 L7/L12、Omp10、Omp19、Omp28、Omp31 基因克隆到植物表達(dá)載體 pJG053 上，經(jīng) PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定正確后，這些載體將用于后續(xù)對(duì)布菌各個(gè)抗原基因的抗原性與免疫原性的分析。4. 將構(gòu)建成功的攜帶布菌抗原蛋白 L7/L12、Omp10、Omp19、Omp28、Omp3