15358.豬型布魯氏菌外膜蛋白o(hù)mp31抗原決定簇的抗原性研究

1、碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文論文題目論文題目：豬型布魯氏菌外膜蛋白Omp31抗原決定簇的抗原性研究英文題目英文題目：SerologicalacterizationofantigenecityofepitopesintheBrucellaoutermembraneproteinOmp31學(xué)位類學(xué)位類別：理學(xué)碩士研究生姓研究生姓名：劉麗娜學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)：201020076學(xué)科學(xué)科(領(lǐng)域領(lǐng)域)名稱名稱：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教指導(dǎo)教師：王建英職稱：職

2、稱：教授協(xié)助指導(dǎo)教協(xié)助指導(dǎo)教師：師：杜志強(qiáng)職稱：職稱：副教授2013年5月27日分類號(hào)：分類號(hào)：Q78Q78密級(jí)：級(jí)：公開(kāi)公開(kāi)UDC：學(xué)校代碼：學(xué)校代碼：1012710127內(nèi)蒙古科技大學(xué)碩士學(xué)位論文I摘要布魯氏菌病（Brucellosis，簡(jiǎn)稱布病），是由布魯氏菌（Brucella）侵入動(dòng)物機(jī)體內(nèi)，引起的一種人畜共患病。該病主要會(huì)引起慢性感染及波狀熱，甚至?xí)鹆鳟a(chǎn)和不孕不育，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的發(fā)展，威脅著人類生命健康。因此，控制該病的

3、擴(kuò)散已成為現(xiàn)在最需要解決的問(wèn)題，而對(duì)容易感染的動(dòng)物和人群，最有效的控制途徑就是進(jìn)行疫苗的接種。本研究利用DNASTAR軟件對(duì)已知omp31基因序列做了系統(tǒng)分析，通過(guò)蛋白質(zhì)的親水性，最大親水性，柔韌性，測(cè)潛在的蛋白質(zhì)抗原決定簇，表面可能性進(jìn)行預(yù)測(cè)，找到其抗原決定簇區(qū)域。該蛋白是一種跨膜脂蛋白質(zhì)，形狀為β折疊桶形；分子的N末端具有很強(qiáng)的信號(hào)肽序列。在該蛋白的4874以及193227氨基酸殘基的序列，很可能就是該蛋白的抗原決定簇區(qū)域。此外，以

4、豬型布魯氏菌S2作為研究對(duì)象，利用實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的含有omp31片段的重組質(zhì)粒及bls質(zhì)粒為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到omp31、omp31193227基因片段，以及去掉N短9個(gè)氨基酸的bls基因片段；利用融合PCR方法進(jìn)行omp31193227抗原決定簇區(qū)域和N端缺失9個(gè)氨基酸的bls融合基因片段的擴(kuò)增。將擴(kuò)增好帶有酶切位點(diǎn)的omp31193227bls、omp31、omp31193227、bls基因片段，與pET28a進(jìn)行連接，經(jīng)過(guò)菌落

5、PCR、雙酶切及測(cè)序鑒定，成功構(gòu)建出了重組質(zhì)粒pET28aomp31193227bls、pET28aomp31、pET28aomp31193227、pET28abls。將成功的質(zhì)粒導(dǎo)入表達(dá)菌種TL129中，用誘導(dǎo)劑IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。成功表達(dá)出Omp31193227BLS蛋白、Omp31蛋白及BLS蛋白。經(jīng)超聲波破碎，在SDSPAGE蛋白電泳進(jìn)行分析顯示，三種重組蛋白都是以包涵體的形式存在的。經(jīng)包涵體洗滌、Histag親和層析柱的純化

6、，SDSPAGE檢測(cè)Omp31沒(méi)有純化出理想的蛋白。利用實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的pET28aomp314874、pET28abls全長(zhǎng)進(jìn)行蛋白質(zhì)純化得到抗原，用注射家兔得到的血清抗體，通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)、免疫雙擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)及凝集實(shí)驗(yàn)進(jìn)行抗原抗體體外免疫反應(yīng)，結(jié)果顯示：BLS所攜帶的Omp31的4874個(gè)氨基酸多肽比BLS本身的免疫原性強(qiáng)，說(shuō)明BLS十聚體的結(jié)構(gòu)具有聚合放大的功能，這與BLS本身的結(jié)構(gòu)有很大的關(guān)聯(lián)。因此，Omp314874BLS抗原將