內(nèi)源性TGFβ1和TL1A對高糖所致血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、研究背景:血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過度是糖尿病血管病變發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié),高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制尚未闡明。有研究表明,細(xì)胞因子合成和生物活性改變在內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中可能起到重要作用。TGF-β1與TL1A均為與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的細(xì)胞因子,TGF-β1被認(rèn)為是內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者,然而,高糖條件下內(nèi)皮細(xì)胞自分泌的TGF-β1與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的直接關(guān)聯(lián),國內(nèi)未見報(bào)道,國外僅見個(gè)別報(bào)道,對于內(nèi)皮細(xì)胞暴露給高糖是否引起TGF-β1生成增多也仍有爭議。

2、TL1A是一種新近發(fā)現(xiàn)的在血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量平衡中起著重要作用的多功能細(xì)胞因子,是否參與了糖尿病血管病變的發(fā)生發(fā)展,目前國內(nèi)外未見相關(guān)報(bào)道。
　　目的:觀察高糖條件下內(nèi)皮細(xì)胞TGF-β1和TL1A的表達(dá),探討內(nèi)皮細(xì)胞自分泌的TL1A和TGF-β1對細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:1.以不同濃度(5.6mM,11.2 mM,22.4 mM,33.6 mM)葡萄糖孵育人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞24h,或以22.4 mM葡萄糖培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

3、不同時(shí)間(0h,6h,12h,24h,48h),RT-PCR檢測各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TGF-β1和TL1A mRNA表達(dá),Western bloting檢測TGF-β1和TL1A蛋白的表達(dá)。5.6mM葡萄糖+16.8 mM甘露醇作為高滲對照。
　　2.將孵育的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為正常對照組、正常糖+TGF-β1組、正常糖+TL1A組、高糖對照組、高糖+TGFβ1-Ab組和高糖+TL1A-Ab組。Annexin V-FITC/PI雙

4、染色、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,酶標(biāo)法檢測caspase-3活性。
　　結(jié)果:用11.2 mM、22.4 mM和33.6 mM葡萄糖孵育人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞24h,內(nèi)皮細(xì)胞TGF-β1mRNA、TL1A mRNA以及它們的蛋白表達(dá)均顯著高于正常對照組(P<0.01),其中以22.4 mM葡萄糖孵育條件下表達(dá)最高。以22.4 mM葡萄糖孵育HUVEs不同時(shí)間,二種細(xì)胞因子的mRNA和蛋白表達(dá)顯著高于0h對照組(P<0.01),其中TGF

5、-β1的表達(dá)高峰在12h,而TL1A表達(dá)呈現(xiàn)明顯的時(shí)間依賴性。正常對照組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡百分率為4.09％±0.32%,高糖對照組細(xì)胞凋亡率為21.06%±3.05%,兩組細(xì)胞凋亡率具有顯著性差異(P<0.01)。于正常糖培養(yǎng)液中分別加入外源性的TGF-β1或TL1A,HUVEs凋亡率分別為15.26%±2.93%和35.45%±3.91%,均顯著高于正常對照組(P<0.01)。在高糖培養(yǎng)液中加入TL1A抗體9μg/ml,人臍靜脈內(nèi)

6、皮細(xì)胞凋亡率為5.02%±0.48%,顯著低于高糖對照組(P<0.01),而與正常對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而于高糖培養(yǎng)液中加入抗TGFβ1抗體30μg/ml,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率為20.93%±3.21%,與高糖對照組相近,二者不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。高滲透壓不引起細(xì)胞凋亡。Caspase-3活性變化趨勢與細(xì)胞凋亡率變化結(jié)果相近。
　　結(jié)論:1.高糖上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞TGF-β1和TL1A的表達(dá);
　　2. TL1A是高