基于核酸適體的腺苷檢測(cè)新方法及應(yīng)用研究.pdf

1、腺苷是一種內(nèi)源性核苷，能參與血管神經(jīng)舒張活動(dòng)，具有抗心律失常的功效。因其在中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)信號(hào)表達(dá)中的重要作用，腺苷受到廣泛關(guān)注。另外，大量的研究表明，實(shí)體瘤細(xì)胞因其快速生長(zhǎng)導(dǎo)致缺氧和壞死，導(dǎo)致腺嘌呤核苷酸降解釋放大量腺苷。釋放的腺苷又為腫瘤的快速生長(zhǎng)提供了環(huán)境，從而導(dǎo)致更高濃度的腺苷在實(shí)體瘤中蓄積。尿中的腺苷水平反映了機(jī)體中腺嘌呤核苷酸的降解水平。一些研究證實(shí)了腺苷作為腫瘤的潛在生物標(biāo)志物的重要意義，尿腺苷還被用來(lái)檢測(cè)疾病的病程

2、。此外，在生理狀態(tài)下直接監(jiān)測(cè)腺苷波動(dòng)在心、腦生理功能的研究中扮演著不可忽視的角色。目前已建立的腺苷檢測(cè)方法大多數(shù)存在儀器設(shè)備昂貴、操作費(fèi)時(shí)且需要復(fù)雜的樣本前處理等缺陷，因此建立腺苷檢測(cè)新方法有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　本文第二章基于腺苷與其適體特異性識(shí)別和腺苷適體偶聯(lián)金納米粒子自組裝導(dǎo)致共振光散射信號(hào)放大建立了腺苷檢測(cè)新方法。研究表明：在磷酸緩沖溶液中，腺苷與腺苷適體特異性結(jié)合，打開(kāi)適體-DNA雙鏈體結(jié)構(gòu)開(kāi)關(guān)，形成G-四聯(lián)體，誘導(dǎo)金

3、納米粒子聚集，導(dǎo)致體系的共振光散射大大增強(qiáng)，體系最大RLS峰位于495.0nm，且腺苷濃度為6.0×10-9～1.15×10-7mol·L-1時(shí)，與體系共振光散射強(qiáng)度變化值呈良好的線性關(guān)系。該方法檢測(cè)腺苷的檢出限為1.8×10-9mol·L-1，人工尿樣分析的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.55％，4.37%，5.85%，加標(biāo)回收率分別為96.3%，98.8%，103.4%（n=6）。該方法簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，選擇性好，準(zhǔn)確度高，用于肺癌病人尿中

4、腺苷的測(cè)定，結(jié)果與高效液相色譜法一致。
　　本文第三章基于核酸適體結(jié)構(gòu)開(kāi)關(guān)偶聯(lián)6-羧基熒光素和金納米粒子作為熒光能量供受體對(duì)的熒光共振能量轉(zhuǎn)移，建立了腺苷檢測(cè)新方法。在20mmol·L-1 Tris-HCl（pH=7.4）緩沖液中，腺苷加入后的濃度為2.0×10-8～1.8×10-6mol·L-1時(shí)，腺苷濃度與體系DF呈良好的線性關(guān)系。該方法測(cè)定腺苷的檢出限為6.0×10-9mol·L-1。分別把腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液加入選定的干擾物質(zhì)混合