核酸適體分離細(xì)菌內(nèi)毒素的應(yīng)用研究.pdf

1、核酸適體作為一段寡核苷酸序列，具有親和力高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、免疫原性低等特點(diǎn)，其在靶向藥物、生物傳感器、藥物分離臨床診斷等方面有廣闊的應(yīng)用前景。
　　本課題利用EAQ3和B2兩條對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素表現(xiàn)了親和力的序列特異性結(jié)合內(nèi)毒素，達(dá)到分離去除內(nèi)毒素的目的。通過PCR技術(shù)擴(kuò)增EAQ3和B2序列，用擴(kuò)增的得到的序列構(gòu)建核酸適體-磁珠體系和核酸適體-膜體系，對(duì)兩條序列的親和力進(jìn)行比對(duì)并進(jìn)行內(nèi)毒素分離操作。
　　通過DNAMAN6.

2、0.3.99對(duì)兩條序列進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果表明兩條序列均形成了莖環(huán)結(jié)構(gòu)，且所形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)數(shù)相同。對(duì)PCR體系和條件進(jìn)行探索后擴(kuò)增得到了EAQ3和B2序列的ssDNA。利用擴(kuò)增得到的ssDNA制備核酸適體-磁珠體系，經(jīng)過吸附動(dòng)力學(xué)曲線擬合，EAQ3和B2序列在10分鐘內(nèi)對(duì)內(nèi)毒素的吸附量分別達(dá)到1207 EU/g和991 EU/g，吸附效果良好，過程快速。核酸適體-膜體系分離內(nèi)毒素的實(shí)驗(yàn)中，EAQ3和 B2序列的最高吸附量也分別達(dá)到了1