甜菜夜蛾抗多殺菌素的機(jī)理研究.pdf

1、甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHübner)是一種世界性分布、間歇性大發(fā)生的，以危害蔬菜為主的雜食性害蟲，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大危害。長期的化學(xué)防治，甜菜夜蛾已對許多類殺蟲劑產(chǎn)生了很高的抗藥性。多殺菌素是一種作用機(jī)制獨(dú)特的新型殺蟲劑，對甜菜夜蛾的防治效果顯著，但是近年來發(fā)現(xiàn)甜菜夜蛾已對多殺菌素產(chǎn)生了一定的抗藥性。但是甜菜夜蛾對多殺菌素的抗性機(jī)制的研究很少，本研究選用上海市郊的甜菜夜蛾進(jìn)行了室內(nèi)敏感和抗性品系的篩選，對甜菜夜蛾抗多

2、殺菌素的機(jī)制進(jìn)行了初步的研究，主要結(jié)果如下。 采用浸葉法進(jìn)行抗性品系的篩選，當(dāng)篩選到第5代時，抗性是敏感的345.4倍，可以看出甜菜夜蛾對多殺菌素的抗藥性發(fā)展速度較快，易產(chǎn)生高抗性。選用氰戊菊酯、辛硫磷、滅多威、甲氨基阿維菌素、氟氯氰菊酯等5種不同類型的藥劑對多殺菌素進(jìn)行交互抗性的測定，結(jié)果顯示這些藥劑均對多殺菌素沒有交互抗性。用敏感、抗性品系3齡幼蟲通過點滴法分別測定PBO、TPP、DEF、DEM對多殺菌素的增效作用，敏感品系

3、分別增效0.7、0.5、1.0、0.6倍，抗性品系分別增效9.8、1.5、2.6、1.5倍。其中PBO對抗性品系的增效作用最為明顯，為9.8倍。對谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)和多功能氧化酶O-脫甲基進(jìn)行了酶活測定，結(jié)果GST在抗性品系和敏感品系中活性沒有顯著變化，活性比為1.0倍；抗性品系的多功能氧化酶O-脫甲基活性是敏感品系的5.2倍，表明甜菜夜蛾對多殺菌素的抗性與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶無關(guān)，可能與多功能氧化酶0-脫甲基活性增高有關(guān)。

4、 以5齡甜菜夜蛾抗性品系的總RNA為模板，采用一對昆蟲細(xì)胞色素P450簡并引物，利用反轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增并篩選出2個新的長度約450bp的甜菜夜蛾細(xì)胞色素P450基因cDNA片段，并對這些序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示，這2個P450基因片段分別屬于細(xì)胞色素P450CYP4家族的CYP4S和CYP4G2個亞家族，二者分別命名為Secyp4s8-likeSecyp4g31-like基因。其中前一個基因片段的長

5、度為441bp，推導(dǎo)的氨基酸序列長度為146個氨基酸殘基；而后一個基因片段的長度為456bp，推導(dǎo)的氨基酸序列長度為151個氨基酸殘基。 本研究利用熒光定量PCR技術(shù)對克隆得到的2個細(xì)胞色素P450基因在不同品系甜菜夜蛾體內(nèi)的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測。我們重新設(shè)計了熒光定量PCR引物，然后利用絕對定量的方法檢測了這2個基因在不同品系甜菜夜蛾體內(nèi)的拷貝數(shù)。結(jié)果顯示，Secyp4s8-like基因和Secyp4g31-like基因在抗性品