多殺菌素對(duì)甜菜夜蛾的作用受體及作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、多殺菌素類殺蟲劑具有高效，安全，廣譜等特點(diǎn)，是目前最具潛力的生物殺蟲劑之一。研究發(fā)現(xiàn)多殺菌素具有獨(dú)特的殺蟲機(jī)制，作用時(shí)表現(xiàn)出神經(jīng)毒劑特有的中毒癥狀。已有的研究認(rèn)為多殺菌素主要作用于煙堿型乙酰膽堿受體和γ-氨基丁酸受體，但是其具體的作用機(jī)制并不明確。
　　 本研究是以具有殺蟲活性的多殺菌素浸潤(rùn)葉片喂食甜菜夜蛾，并提取喂食24h的甜菜夜蛾總蛋白。通過比較多殺菌素處理與未處理的甜菜夜蛾的蛋白質(zhì)組的差異，解析多殺菌素對(duì)甜菜夜蛾的作用機(jī)制

2、，進(jìn)而對(duì)多殺菌素受體蛋白進(jìn)行初步研究。實(shí)驗(yàn)采用雙向電泳技術(shù)(2-DE)分離甜菜夜蛾總蛋白，運(yùn)用Imagemaster6.0對(duì)雙向電泳凝膠圖譜進(jìn)行斑點(diǎn)檢測(cè)、分析，找到差異表達(dá)的蛋白，通過酶解消化，借助質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)軟件鑒定了多殺菌素處理與未處理的差異表達(dá)蛋白，并對(duì)其功能進(jìn)行了系統(tǒng)的分析。
　　 通過實(shí)驗(yàn)，我們獲得了多殺菌素處理以及對(duì)照的正常幼蟲的2-DE圖譜。應(yīng)用Imagemaster6.0軟件對(duì)掃描得到的2-DE圖譜進(jìn)行檢

3、測(cè)分析，在相同條件下檢測(cè)到的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)分別為多殺菌素處理355個(gè)，對(duì)照329個(gè)。經(jīng)差異比較和顯著性檢驗(yàn)共得到25個(gè)差異蛋白，其中多殺菌素處理后表達(dá)上調(diào)的蛋白點(diǎn)13個(gè)，表達(dá)下調(diào)的蛋白點(diǎn)12個(gè)。由于蛋白質(zhì)點(diǎn)低豐度及技術(shù)問題的局限，我們對(duì)部分差異蛋白進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定。實(shí)驗(yàn)鑒定到了12個(gè)表達(dá)差異較大的蛋白點(diǎn)(P<0.05)，其中包括羧酸酯酶、細(xì)胞色素P450等保護(hù)酶，以及ATP酶、蛻皮激素受體蛋白、肌動(dòng)蛋白等。通過對(duì)差異蛋白的分析，發(fā)現(xiàn)這些酶等

4、蛋白分子與昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育以及對(duì)殺蟲劑的應(yīng)激反應(yīng)和解毒代謝等功能相關(guān)，為闡明多殺菌素的殺蟲機(jī)理和甜菜夜蛾抗性機(jī)制提供了重要依據(jù)。
　　 為進(jìn)一步研究這些蛋白與多殺菌素的作用，本研究選用V-ATPase為研究對(duì)象，以巴佛洛霉素A1(V-ATPase抑制劑)與多殺菌素混合使用，對(duì)甜菜夜蛾進(jìn)行生測(cè)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示加入巴佛洛霉素A1后，多殺菌素殺蟲活性提高，并對(duì)V-ATPase活性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示通過抑制甜菜夜蛾VATPase的活性，使