地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)RH株增殖及宿主與弓形蟲(chóng)多不飽和脂肪酸代謝的影響.pdf

1、研究背景及目的：
　　剛地弓形蟲(chóng)（Toxoplasma gondii）是一種頂復(fù)門(mén)專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(chóng)，可以導(dǎo)致人等哺乳類動(dòng)物，甚至鳥(niǎo)類感染，引起弓形蟲(chóng)病。大部分人在感染弓形蟲(chóng)后通常處于無(wú)癥狀的隱性感染階段，一旦機(jī)體免疫力受損，體內(nèi)休眠期的弓形蟲(chóng)將快速增殖引起嚴(yán)重的弓形蟲(chóng)病，尤其是在患有艾滋病，使用免疫抑制劑后或器官移植病人中更加嚴(yán)重。臨床上，患者長(zhǎng)期應(yīng)用皮質(zhì)醇激素極易引發(fā)急性弓形蟲(chóng)病，研究表明外源性糖皮質(zhì)激素增加會(huì)增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)多種病原

2、體易感性。地塞米松作為一種糖皮質(zhì)激素在臨床上廣泛應(yīng)用，它不僅具有抗炎、抗休克等作用，同時(shí)還會(huì)影響脂肪酸代謝。有研究表明地塞米松對(duì)大鼠巨噬細(xì)胞中的弓形蟲(chóng)有一定增殖作用，但其作用機(jī)制不清楚。多不飽和脂肪酸不光是生物體細(xì)胞膜的重要組成部分，同時(shí)還參與細(xì)胞代謝信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程，本文研究多不飽和脂肪酸代謝在地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)RH株增殖中的作用。
　　方法:
　　1.用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)增殖作用。
　　2.吉

3、氏染色觀察細(xì)胞內(nèi)弓形蟲(chóng)增殖率，侵襲率。
　　3.細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)的增殖作用。
　　4.氣相色譜分析地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)RH株，人乳腺癌231細(xì)胞多不飽和脂肪酸代謝的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測(cè)顯示地塞米松能促進(jìn)弓形蟲(chóng)增殖并呈濃度依賴性。地塞米松作用弓形蟲(chóng)后，24h時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組相比差異不明顯。但地塞米松作用弓形蟲(chóng)48h后增殖作用明顯，10-7,10-6,10-5,10-4mg/ml不同濃度

4、地塞米松作用72h后實(shí)驗(yàn)組 OD值分別為0.4570±0.017,0.5545±0.023,0.6024±0.035,0.6535±0.046,而對(duì)照組為0.3505±0.012，實(shí)驗(yàn)組OD值高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。
　　2.10-4mg/ml地塞米松作用弓形蟲(chóng)不同時(shí)間后，吉氏染色，1000倍顯微鏡下觀察，處理組細(xì)胞內(nèi)假包囊體積明顯大于對(duì)照組。計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)組地塞米松作用24h,48h,60h,72h后每100個(gè)

5、231細(xì)胞中有65±1,88±2,99±1,100±0個(gè)細(xì)胞感染弓形蟲(chóng)，而對(duì)照組為51±3,68±2,83±2,92.3±2。實(shí)驗(yàn)組感染率明顯高于對(duì)照組，差異均有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。計(jì)數(shù)地塞米松實(shí)驗(yàn)組48h,60h,72h后100個(gè)細(xì)胞內(nèi)弓形蟲(chóng)數(shù)量分別為497±5,1071±21,4847±115高于對(duì)照組(269±7,573±11,1057±42)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。
　　3.細(xì)胞計(jì)數(shù)法顯示，10-

6、4mg/mlDXM作用48h后對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間細(xì)胞外弓形蟲(chóng)數(shù)量有明顯差異(P＜0.01).10-4mg/ml DXM作用48h,72h,96h后細(xì)胞外弓形蟲(chóng)數(shù)量分別為(18±5,119±16,154±29)×104個(gè)/ml，而對(duì)照組為(17±5,65±10,69±10)×104個(gè)/ml。
　　4.氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)弓形蟲(chóng)脂肪酸多為長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸，主要有以下幾種組成：c16:0、c18:0、c18:1、c18:2、c18:3、c2

7、0:0、c20:1、c20:2、c20:4、c22:1、c22:2,其中大部分為多不飽和脂肪酸。氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組弓形蟲(chóng)和231細(xì)胞 c18:1油酸含量明顯升高；感染弓形蟲(chóng)的231細(xì)胞多不飽和脂肪酸含量明顯高于未感染弓形蟲(chóng)的231細(xì)胞，而地塞米松作用后感染弓形蟲(chóng)的231細(xì)胞多不飽和脂肪酸量與未感染弓形蟲(chóng)的231細(xì)胞相近。
　　結(jié)論：
　　1.地塞米松對(duì)弓形蟲(chóng)有明顯的增殖作用，呈濃度依賴型。
　　2.地塞米松能影響弓