GABA信號(hào)途徑參與樹突狀細(xì)胞的抗原遞呈及其在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中的作用.pdf

1、背景:γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid，GABA）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中是最主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，在大腦和脊髓中分布廣泛。在生理?xiàng)l件下，GABA由神經(jīng)元內(nèi)的谷氨酸脫羧酶(GAD)催化谷氨酸形成。GABA主要通過(guò)與GABA受體結(jié)合產(chǎn)生生物學(xué)信號(hào)發(fā)揮作用的。GABA受體包括兩類:一類是A型(GABAA)和C型(GABAC)親離子受體;另一類是B型G蛋白耦聯(lián)代謝性受體(GABAB)。GABA、GABA受體及其代謝酶等分子

2、統(tǒng)稱為GABA能信號(hào)系統(tǒng)(GABAergicsignal system)。對(duì)于正常大腦功能，神經(jīng)活動(dòng)，信息處理和塑造，信息網(wǎng)絡(luò)同步，以及疾病中，GABA能信號(hào)系統(tǒng)都有著重要作用。GABA藥物治療已經(jīng)被用于焦慮，戒酒，癲癇，以及誘導(dǎo)鎮(zhèn)靜，麻醉。
　　GABA能信號(hào)系統(tǒng)不僅在中樞系統(tǒng)發(fā)揮著重要的作用，在外周系統(tǒng)中也承擔(dān)著重要的調(diào)控作用。其在脾臟、胃、肝臟、肺以及生殖系統(tǒng)中都有功能性表達(dá)。在免疫系統(tǒng)中，GABA能系統(tǒng)可以調(diào)控炎癥反應(yīng)。G

3、ABA受體已被證實(shí)在免疫細(xì)胞上存在，降低外周巨噬細(xì)胞炎癥因子的產(chǎn)生。GABAA受體激動(dòng)劑能夠降低細(xì)胞毒性免疫反應(yīng)以及皮膚的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。
　　樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cells，DC)作為機(jī)體最重要的抗原遞呈細(xì)胞，在黏膜耐受方面扮演著十分重要的角色。有研究證明一些腸道細(xì)菌如腸道乳酸菌可與DC細(xì)胞的表面成分發(fā)生相互反應(yīng)，并被證明細(xì)菌是連接于DC細(xì)胞上的特異性細(xì)胞間黏附分子-3結(jié)合的非整合素(DC-specific ICAM

4、-grabbing non-intergrin，DC-SIGN)。DC-SIGN是DC細(xì)胞特定的受體在DC細(xì)胞的粘附，遷移，炎癥，激活T細(xì)胞，觸發(fā)免疫應(yīng)答及參與病原體的免疫逃逸，腫瘤發(fā)展等起到重要的作用。
　　炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是一組病因不明的慢性腸道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制至今仍不清楚，目前發(fā)現(xiàn)遺傳易感性、黏膜免疫和腸道微生態(tài)環(huán)境三者的相互作用可能參與IBD的發(fā)病。腸道內(nèi)的益

5、生菌群，如雙歧桿菌、乳酸桿菌等是人體和動(dòng)物腸道內(nèi)的正常菌群，在維持腸道內(nèi)的正常菌群平衡，提高機(jī)體免疫能力，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，以及抑制腸道病原菌等方面均發(fā)揮著重要的生理功能。許多研究都表明腸道細(xì)菌與免疫系統(tǒng)的相互作用在IBD的發(fā)病機(jī)制中起了重要的作用。
　　目的:以上研究背景提示我們?nèi)ヌ骄縂ABA能系統(tǒng)是否參與腸道粘膜DC細(xì)胞的抗原遞呈，并進(jìn)一步探究在其在腸炎中的作用。
　　方法:運(yùn)用傳代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培育小鼠髓源iDC細(xì)胞株

6、，并運(yùn)用Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)DC細(xì)胞上的GABA能系統(tǒng)的表達(dá)。篩選腸道益生菌菌體卷曲乳酸桿菌及病原菌沙門氏菌，并用FITC標(biāo)記菌體，以此檢測(cè)不同終濃度的GABA，及GABA相關(guān)受體激動(dòng)劑和拮抗劑對(duì)菌體與DC細(xì)胞的黏附作用的影響。運(yùn)用Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)，在DC細(xì)胞在受到刺激成熟分化過(guò)程中，其表面的DC-SIGN蛋白的表達(dá)是否受到GABA的影響。建立DSS小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，建立初期每組分別每天給予一定量

7、GABA受體的激動(dòng)劑以及拮抗劑，然后觀察檢測(cè)不同指標(biāo)，如記錄反應(yīng)每日體重變化，便血情況的結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)DAI的評(píng)分。七日后處死各組小鼠，取其結(jié)腸，分別用于石蠟切片HE染色，CD45免疫組化染色，以及髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidas，MPO)活性檢測(cè)反應(yīng)組織炎性細(xì)胞侵潤(rùn)水平。
　　結(jié)果:證明DC細(xì)胞上存在GABA能信號(hào)系統(tǒng)，并發(fā)現(xiàn)GABA能夠抑制卷曲乳酸桿菌菌與DC細(xì)胞的結(jié)合，并且這種抑制主要通過(guò)作用于DC細(xì)胞上的GA