硝酸酯在DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠模型中的治療作用.pdf

1、背景：炎癥性腸病（IBD）是慢性腸道炎性紊亂疾病，伴有過量的炎性因子及黏附分子及活性氧反應(yīng)的產(chǎn)生。IBD可能為腸道粘膜屏障缺陷引起對棲生菌的異常免疫反應(yīng)，引起促炎反應(yīng)亢進(jìn)，抑炎反應(yīng)下降，炎癥平衡失調(diào)，促炎炎癥因子的過量產(chǎn)生，進(jìn)一步引起腸道損傷，形成惡性循環(huán)。
　　目前治療IBD的藥物仍較單一，最新的生物制劑雖然療效較好，但是價(jià)格昂貴，給病人造成較重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，使開發(fā)低價(jià)常用藥物成為可行。硝酸酯口服后在體內(nèi)代謝生成單硝酸酯，后者生成N

2、O，激活鳥苷酸環(huán)化酶，使平滑肌內(nèi)cGMP增多，引起血管平滑肌松弛。一氧化氮在腸道屏障和免疫功能起到重要作用，作為維持胃腸粘膜的穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)劑，具有調(diào)節(jié)粘膜血流灌注，以及調(diào)控微血管和內(nèi)皮通透性的作用。還可以下降白細(xì)胞的黏附，阻止巨噬細(xì)胞的激活，阻止Th1類炎癥因子的被激活。
　　腸道一氧化氮（NO）產(chǎn)生受損，可能在IBD的起因，以及進(jìn)展起重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過對一系列指標(biāo)的觀察，利用 DSS化學(xué)誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠模型，討論硝酸酯在急性實(shí)驗(yàn)性小

3、鼠結(jié)腸炎中的作用。
　　目的：
　　1利用DSS建立小鼠結(jié)腸炎模型
　　2探討硝酸酯對DSS實(shí)驗(yàn)性小鼠急性結(jié)腸炎的治療效果，并對其機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：
　　1．20只清潔級BABL/c雌性小鼠，6-8周齡，隨機(jī)分為模型組和對照組，對照組正常飲水一周，實(shí)驗(yàn)組連續(xù)飲用4％DSS溶液一周，觀察小鼠體重、毛發(fā)、解便等大體情況，一周后處死小鼠，分離小鼠結(jié)腸，予4%甲醛固定，行HE染色，光鏡下組織學(xué)評定。

4、r>　　2．60只清潔級BABL/c雌性小鼠，6-8周齡，隨機(jī)分為結(jié)腸炎模型組，硝酸酯治療組與正常對照組，每組各20只，小鼠急性結(jié)腸炎模型采用口服葡聚糖硫酸鈉(DSS)溶液完成,治療組DSS溶液中加入硝酸酯，對照組與正常飲水處理。觀察小鼠體重、毛發(fā)、解便等大體情況，與實(shí)驗(yàn)第三天、第七天處死小鼠，分離小鼠結(jié)腸，予4%甲醛固定及液氮儲存，行HE染色，光鏡下組織學(xué)評定，免疫組化測定腸道組織MPO表達(dá)，WB測定小鼠結(jié)腸NF-κB,i NOS,T

5、NF-α的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1 DSS引起的小鼠結(jié)腸炎主要表現(xiàn)為腹瀉、血便、體重下降、活動減少、毛發(fā)失光澤等。而光鏡下組織病理學(xué)變化,主要表現(xiàn)為結(jié)腸粘膜屏障的破壞，引起全結(jié)腸多發(fā)性小潰瘍，隱窩破壞及異常隱窩，繼發(fā)黏膜、黏膜下炎癥，少數(shù)病灶炎癥可侵及黏膜層，浸潤的炎癥細(xì)胞以中性粒細(xì)胞為主，伴少量淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
　　2硝酸酯減輕小鼠結(jié)腸炎的疾病活動指數(shù)(DAI)，與模型組結(jié)腸炎組相比，硝酸酯治療組小鼠結(jié)腸組織病

6、理損傷明顯減輕（P＜0.05），白細(xì)胞聚集減少，髓過氧化物酶（MOP）活性明顯降低（P＜0.05），NF-κB表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），結(jié)腸局部促炎因子TNF-α的產(chǎn)生減少（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1 DSS化學(xué)誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型適合結(jié)腸炎藥物治療研究
　　2硝酸酯可以用于治療由DSS誘導(dǎo)的小鼠急性腸道損傷：
　　2.1口服硝酸酯，通過提供外源性NO，逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的結(jié)腸一氧化氮水平，減少iNOS的產(chǎn)生，