乳化異氟醚后處理對(duì)在體兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：乳化異氟醚是已獲國(guó)家Ⅱ類新藥認(rèn)證的新型麻醉藥，經(jīng)靜脈注射具有可靠的安全性和有效性，兼具靜脈麻醉藥與揮發(fā)性麻醉藥的優(yōu)點(diǎn)，具有良好的臨床開發(fā)前景。研究表明，乳化異氟醚預(yù)處理具有心肌保護(hù)作用，但乳化異氟醚后處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷影響的研究國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道，本研究旨在觀察乳化異氟醚后處理對(duì)在體兔缺血后心肌損傷的影響并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法：雄性新西蘭白兔，體重2.5～3.0 kg，通過(guò)結(jié)扎和開放左冠狀動(dòng)脈前降支建立在體兔

2、心肌缺血再灌注損傷的動(dòng)物模型。研究?jī)?nèi)容分為三個(gè)部分：第一部分,探討乳化異氟醚后處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響，成功建立模型的新西蘭白兔38只隨機(jī)分為5組：缺血對(duì)照組(CON，n=8)于再灌注前5min靜脈給予0.9％生理鹽水2 ml；缺血后處理組(IPO，n=8)于缺血30 min后，再灌注20 s，缺血20 s,連續(xù)3次，然后再灌注180 min；0.5MAC乳化異氟醚后處理組（LEPO，n=7）于再灌注前3 min時(shí)靜脈注射(1 m

3、l·s-1)乳化異氟醚4～6 ml至呼氣未異氟醚濃度為0.5MAC(1.0 MAC=1.28％)，然后以4～6 ml·kg-1·h-1靜脈輸注乳化異氟醚維持呼氣末濃度0.5MAC至再灌注后2 min；1.0 MAC乳化異氟醚后處理組（HEPO，n=8）于再灌注前3 min時(shí)靜脈注射(1 ml·s-1)乳化異氟醚8～10 ml至呼氣未濃度為1.0MAC，然后以6～8 ml·kg-1·h-1靜脈輸注乳化異氟醚維持呼氣末濃度1.0 MAC至再

4、灌注后2 min；脂肪乳組（INT，n=7）于再灌注前3 min時(shí)靜脈注射(1 ml·s-1)脂肪乳9 ml，然后以7 ml·kg-1·h-1持續(xù)輸注脂肪乳至再灌注后2 min。第二部分，于1.0 MAC乳化異氟醚后處理組分別加入兩種KATP通道阻滯劑，探討線粒體KATP通道在乳化異氟醚后處理心肌保護(hù)中的作用。實(shí)驗(yàn)分為Glibenclamide (GLI,非選擇性KATP通道阻滯劑)+HEPO組（GLI+HEPO,n=8）和5-hydr

5、oxydecanoate (5-HD,線粒體KATP通道阻滯劑)+HEPO組（5-HD+HEPO，n=7），另設(shè)GLI組（n=7）、5-HD組（n=8）和Dimethylsulfoxide組(DMSO，n=7）。第三部分，探討乳化異氟醚后處理對(duì)缺血后心肌細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)分為假手術(shù)組（Sham）：僅在左冠狀動(dòng)脈前降支下穿線，不結(jié)扎；CON組、HEPO組和INT組，方法同上，每組5只。再灌注180 min時(shí)取左室心肌組織，末端脫氧核苷酸

6、轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的生物素脫氧尿苷三磷酸原位切口末端標(biāo)記法（TUNEL）觀察心肌細(xì)胞凋亡、免疫組化測(cè)定心肌組織Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況。觀察指標(biāo)包括血流動(dòng)力學(xué),血清肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性,心肌梗死面積以心肌梗死區(qū)(IS)重占心肌缺血區(qū)(AAR)重的百分比表示，計(jì)算心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）和Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：血流動(dòng)力學(xué)：與基礎(chǔ)值比較，各組再灌注期間HR、MAP、RPP值均明顯下降(

7、P<0.05),組間比較各組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)。心肌梗死面積：各組心肌LV重、AAR重及AAR/LV差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）。與CON組比較，IPO組和HEPO組心肌梗死面積明顯縮小（ P<0.05），LEPO組、INT組、GLI組、5-HD組和DMSO組心肌梗死面積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）；IPO組、HEPO組兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）；與HEPO組比較，GLI

8、+HEPO組、5-HD+EPO組心肌梗死面積明顯增大(P<0.05)。CK和LDH活性：與CON組比較，IPO組和HEPO組CK、LDH活性均明顯降低（ P<0.05），LEPO組、INT組、GLI組、5-HD組和DMSO組CK、LDH活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）；IPO組和HEPO組兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）；與HEPO組比較，GLI+HEPO組、5-HD+EPO組CK、LDH活性明顯升高(P<0.05

9、)。心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）：與Sham組比較，CON組、HEPO組和INT組AI明顯增高(P<0.05)，與CON組和INT組比較，HEPO組AI明顯降低(P<0.05)。Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)情況：與Sham組比較，CON組、HEPO組和INT組Bcl-2、Bax表達(dá)及Bcl-2/Bax比值均明顯增加(P<0.05)；與CON組和INT組比較，HEPO組Bcl-2表達(dá)、Bcl-2/Bax比值明顯增加(P<0.05)、Bax蛋白表