早紅臍橙轉(zhuǎn)色期葉綠素降解與油斑病發(fā)生的相關(guān)性研究.pdf

1、柑橘油斑病是一種由于果皮生理失調(diào)導(dǎo)致的生理性病害，是近年來(lái)江西贛南、重慶奉節(jié)等柑橘主產(chǎn)區(qū)最為突出的采收期果實(shí)生理病害。目前對(duì)油斑病發(fā)生的機(jī)理尚無(wú)明確的結(jié)論，對(duì)油斑病還缺乏有效的防治手段。近年來(lái)我們深入柑橘產(chǎn)區(qū)，對(duì)湖北、江西和重慶等地的柑橘油斑病的發(fā)生規(guī)律進(jìn)行了調(diào)查和統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)柑橘油斑病的發(fā)生機(jī)率與果實(shí)著色程度有關(guān)，葉綠素含量越高，或果面橙黃色的柑橘果實(shí)油斑病發(fā)生的機(jī)率顯著高于果面橙紅的品種類(lèi)型或晚采果實(shí)。從葉綠素降解的動(dòng)態(tài)分析，研究其與

2、柑橘油斑病發(fā)生的內(nèi)在關(guān)系，對(duì)拓展柑橘油斑病發(fā)生的機(jī)制及防治技術(shù)的創(chuàng)新均有十分重要的意義。
　　田間觀察發(fā)現(xiàn)油斑病在早紅臍橙轉(zhuǎn)色期大量發(fā)生，因此本研究以湖北秭歸早紅臍橙為實(shí)驗(yàn)材料，從葉綠素降解入手，采用UPLC技術(shù)，比較分析健康部位和病斑部位果皮中葉綠素代謝產(chǎn)物的變化，并利用各種生理生化的實(shí)驗(yàn)及分析手段，對(duì)柑橘油斑病的發(fā)病機(jī)理進(jìn)行深入探究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.早紅臍橙轉(zhuǎn)色期果皮有色層葉綠素代謝產(chǎn)物的超高效液相色譜(UP

3、LC)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，患病果皮病斑部位脫鎂葉綠素a和脫鎂葉綠甲酯酸a的含量高于果皮健康部位的含量。2014年的患病早紅臍橙樣品，其病斑部位脫鎂葉綠素a和脫鎂葉綠甲酯酸a含量較正常部位含量分別上升了1.551μg/g、0.290μg/g。2015年的患病早紅臍橙樣品，其病斑部位脫鎂葉綠素a含量較正常部位含量顯著性上升了3.174μg/g。
　　2.將葉綠素代謝產(chǎn)物脫鎂葉綠素a和脫鎂葉綠甲酯酸a溶于乙醇溶液后，按一定量分別加入早金甜橙葉肉原

4、生質(zhì)體中，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞破裂速度顯著性快于對(duì)照。實(shí)驗(yàn)中利用早金甜橙的試管苗提取葉肉原生質(zhì)體，在原生質(zhì)體培養(yǎng)液中加入脫鎂葉綠素a/脫鎂葉綠甲酯酸a，并設(shè)置空白對(duì)照，每2h在光學(xué)顯微鏡下，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)葉肉原生質(zhì)體進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，隨著時(shí)間的推移，加入相應(yīng)葉綠素代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液中，原生質(zhì)體的數(shù)目減少得更快。以上結(jié)果表明這兩種葉綠素代謝產(chǎn)物對(duì)原生質(zhì)體細(xì)胞確實(shí)產(chǎn)生了毒害，造成細(xì)胞破裂速度加快。
　　3.葉綠素代謝產(chǎn)物涂抹健康果實(shí)表面會(huì)誘

5、導(dǎo)油斑病癥狀的發(fā)生。分別用脫鎂葉綠素a、脫鎂葉綠甲酯酸a處理健康早紅臍橙果實(shí)表面，并于6d后進(jìn)行觀察，我們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生明顯的油斑病癥狀。從而證實(shí)了葉綠素代謝產(chǎn)物會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂，精油外滲，導(dǎo)致油斑病的發(fā)生。
　　4.早紅臍橙轉(zhuǎn)色期果皮有色層抗氧化系統(tǒng)相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果顯示，患病果皮病斑部位果皮的抗氧化系統(tǒng)相關(guān)酶活性下降，活性氧相關(guān)物質(zhì)含量下降。綜合2014年及2015年的數(shù)據(jù)，分析結(jié)果表明病斑部位SOD、CAT、POD