觀察長(zhǎng)期高脂飲食大鼠視網(wǎng)膜微血管的變化及吡格列酮干預(yù)療效.pdf

1、目的：近年來(lái)，脂代謝紊亂、肥胖因其可導(dǎo)致嚴(yán)重的心腦血管病變而影響人民健康，被日益受到關(guān)注。隨著研究的展開和深入，研究者發(fā)現(xiàn)肥胖、脂代謝紊亂對(duì)視網(wǎng)膜微血管也有影響。目前，有關(guān)高脂血癥、肥胖引發(fā)視網(wǎng)膜微血管損傷的具體機(jī)制尚不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在探討長(zhǎng)期高脂飼養(yǎng)建立的肥胖高脂伴胰島素抵抗SD大鼠模型視網(wǎng)膜微血管的變化以及缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factors，HIF)-1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endo

2、thelial growth factor,VEGF)、細(xì)胞間粘附分子(intercellular adhension molecule，ICAM)-1以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)-β mRNA的表達(dá)變化和吡格列酮的干預(yù)療效。 方法： 18周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組(NC)、高脂飼養(yǎng)組(HF)、高脂加吡格列酮干預(yù)組(HP)。NC組予正常飼料，HF組和HP組

3、予高脂飼料喂養(yǎng)，同時(shí)，HP組予吡格列酮15mg.kg-1.d-1劑量灌胃，NC組、HF組給予等劑量蒸餾水灌胃，每日一次。32周末收集24小時(shí)尿行24小時(shí)尿白蛋白定量檢測(cè)。2天后大鼠情況穩(wěn)定行正常血糖高胰島素鉗夾實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)外周胰島素抵抗程度。其余大鼠處死，采血檢測(cè)空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、血游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)等指標(biāo)；取一側(cè)眼球固定行視網(wǎng)膜毛細(xì)血管鋪片PAS染色以及免疫組織化學(xué)染色，另一側(cè)分離視網(wǎng)膜組織采

4、用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)方法測(cè)定三組大鼠視網(wǎng)膜組織HIF-1、VEGF、ICAM-1和TGF-βmRNA的表達(dá)情況。 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有資料以SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，首先用描述性統(tǒng)計(jì)和分析研究變量分布，符合正態(tài)分布的測(cè)定值以(-χ±s)表示，兩組間的比較采用t檢驗(yàn)，多組間的比較采用方差分析。 結(jié)果： 1.從進(jìn)入實(shí)驗(yàn)第二周開始，高脂飼養(yǎng)組體重即開始增加，32周時(shí)，HF組和HP組大鼠體重、

5、內(nèi)臟脂肪重量及內(nèi)臟脂肪占體重百分比均明顯高于NC組(P均<0.01)。與NC組相比，HF組空腹血糖、胰島素、游離脂肪酸、甘油三酯、24h尿白蛋白定量水平均明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HP組較HF組有所降低。 2.正常血糖高胰島素鉗夾實(shí)驗(yàn)：與NC組相比，HF組的GIR顯著降低，穩(wěn)定狀態(tài)下平均GIR僅為(4.8±1.2)mg.min-1.kg-1，而NC組穩(wěn)定狀態(tài)下平均GIR為(11.3±1.7)mg.min-1.kg-1，差別有顯

6、著意義(P<0.01)，而HP組為(10.1±1.5)mg.min-1.kg-1，與NC組相比，差別有顯著意義(P<0.01)。 3.視網(wǎng)膜毛細(xì)血管鋪片-PAS染色顯示：NC組：動(dòng)脈旁毛細(xì)血管網(wǎng)分布規(guī)則，動(dòng)靜脈血管走形較直，毛細(xì)血管粗細(xì)均勻，內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞規(guī)律分布，形態(tài)規(guī)則，周細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞比例1.082；HF組：動(dòng)脈旁毛細(xì)血管網(wǎng)分布較亂，走形不直，內(nèi)皮細(xì)胞增生，周細(xì)胞減少，且細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，還可見周細(xì)胞凋亡，白細(xì)胞聚集以及無(wú)細(xì)

7、胞毛細(xì)血管形成等現(xiàn)象，但未見影周細(xì)胞及微血管瘤形成，周細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞比例0.483；HP組：動(dòng)脈旁毛細(xì)血管網(wǎng)分布較規(guī)則，走形較直，內(nèi)皮細(xì)胞增生及周細(xì)胞減少現(xiàn)象均有所好轉(zhuǎn)，細(xì)胞形態(tài)亦較規(guī)則，未見無(wú)細(xì)胞毛細(xì)血管，周細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞比例0.755。 4 視網(wǎng)膜毛細(xì)血管鋪片免疫組織化學(xué)染色：可見視網(wǎng)膜血管呈現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性著染，動(dòng)靜脈染色深，微血管染色淺。HF組HIF-1、VEGF的表達(dá)比NC組明顯增強(qiáng)，HP組HIF-1、VEGF的表達(dá)比HF組明顯減弱，

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)，HF組ICAM-1、TGF-B的表達(dá)比NC組明顯增強(qiáng)，HP組ICAM-1、TGF-β的表達(dá)介于NC組和HF組之間。 5 Real time-PCR檢測(cè)：與NC組相比，HF組HIF-1的表達(dá)升高34.15％，HP組與HF組相比下降10.65％；VEGF mRNA表達(dá)增高390％，HP組與HF組相比下降82.6％；HF組ICAM-1、TGF-βmRNA的表達(dá)分別增高20.6％、76.2％，HP組較HF組分別改善1

9、2.3％，40.6％。 結(jié)論： 1.SD大鼠經(jīng)過(guò)32周高脂飲食飼養(yǎng)后體重、內(nèi)臟脂肪重量及內(nèi)臟脂肪占體重百分比均明顯高于正常對(duì)照組。正糖高胰島素鉗夾顯示存在明顯胰島素抵抗。并且空腹血糖、胰島素、游離脂肪酸等也明顯升高。說(shuō)明己成功建立具有高脂、肥胖、胰島素抵抗等特點(diǎn)的大鼠模型。 2.視網(wǎng)膜毛細(xì)血管鋪片PAS染色可見NC組周細(xì)胞減少，內(nèi)皮細(xì)胞增生、白細(xì)胞聚集、無(wú)細(xì)胞毛細(xì)血管形成，提示長(zhǎng)期高脂飲食導(dǎo)致的高脂、肥胖、胰島素

10、抵抗可引起大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮損傷。 3 視網(wǎng)膜毛細(xì)血管鋪片免疫組織化學(xué)染色及Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果提示長(zhǎng)期高脂飲食誘導(dǎo)的高脂肥胖伴胰島素抵抗大鼠的視網(wǎng)膜微血管損傷的發(fā)生可能與HIF-1、VEGF、ICAM-1和TGF-β等細(xì)胞因子的激活有關(guān)。 4 吡格列酮作為過(guò)氧化物酶體增殖體活化受體(PPAR)-γ激動(dòng)劑可能通過(guò)改善胰島素抵抗，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、降低HIF-1、VEGF、ICAM-1、TGF-β等細(xì)胞因子的表達(dá)從