林芝藏豬消化道寄生蟲(chóng)調(diào)查及蛔蟲(chóng)、細(xì)頸囊尾蚴線粒體基因組學(xué)研究.pdf

1、作為一種以草為主的地方特色品種，藏豬因?qū)Ω吆０蔚貐^(qū)嚴(yán)寒、缺氧等極端氣候具有極好的適應(yīng)能力而成為青藏高原牧民主要的食物來(lái)源和經(jīng)濟(jì)來(lái)源，其作用不可或缺。由于采取自由放牧的形式，粗放的管理模式，畜群結(jié)構(gòu)不合理以及藏豬品種的退化，再加上薄弱的疾病防控意識(shí)，因此近年來(lái)藏豬的各種疾病，尤其是寄生蟲(chóng)疾病的發(fā)病率逐年升高。其中最為常見(jiàn)的寄生蟲(chóng)是蛔蟲(chóng)和細(xì)頸囊尾蚴，一旦發(fā)生感染，嚴(yán)重影響藏豬的生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)性能，不但給藏豬產(chǎn)業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)也會(huì)提

2、高人類感染人畜共患寄生蟲(chóng)疾病的風(fēng)險(xiǎn)。故本研究在西藏藏豬消化道寄生蟲(chóng)病流行情況，蛔蟲(chóng)和細(xì)頸囊尾蚴的分離和鑒定以及線粒體基因組學(xué)等方面展開(kāi)調(diào)查和研究，結(jié)果如下:
　　1.西藏林芝地區(qū)藏豬消化道寄生蟲(chóng)流行情況調(diào)查
　　采用寄生蟲(chóng)學(xué)完全剖檢法、糞便蟲(chóng)卵檢查法，112頭屠宰藏豬、73份糞便進(jìn)行寄生蟲(chóng)病流行情況調(diào)查。結(jié)果顯示:共檢測(cè)出寄生蟲(chóng)11種，隸屬于5門、6綱、9目、10科、10屬，其中線蟲(chóng)5種，絳蟲(chóng)蚴2種，原蟲(chóng)2種，吸蟲(chóng)1種，棘頭

3、蟲(chóng)1種。優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為細(xì)頸囊尾蚴(42.9％)、野豬后圓線蟲(chóng)(38.4％)、棘球蚴(33.0％)、蛔蟲(chóng)(30.4％)、肝片吸蟲(chóng)(26.8％)、食道口線蟲(chóng)(18.8％)、毛首線蟲(chóng)(15.2％)、球蟲(chóng)(15.1％)、結(jié)腸小袋纖毛蟲(chóng)(6.8％)、蛭形巨吻棘頭蟲(chóng)(5.6％)、六翼泡首線蟲(chóng)(2.7％)。調(diào)查結(jié)果表明，林芝地區(qū)藏豬胃腸道寄生蟲(chóng)感染普遍，感染率較高。
　　2.藏豬蛔蟲(chóng)nad1、cox1和cox2基因擴(kuò)增及序列分析
　　本試驗(yàn)以

4、屠宰藏豬體內(nèi)分離的蛔蟲(chóng)為研究對(duì)象，運(yùn)用PCR方法，以不同引物分別擴(kuò)增nad1、cox1和cox2三個(gè)基因序列，擴(kuò)增后的片段純化后克隆至pGEM(@)-T Easy載體，轉(zhuǎn)化，并對(duì)擴(kuò)增后陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序和序列分析，以鑒定藏豬蛔蟲(chóng)的種類。結(jié)果顯示:藏豬蛔蟲(chóng)的nad1、cox1和cox2序列均與豬蛔蟲(chóng)（登錄號(hào):X54253.1，豬蛔蟲(chóng)）相似性為99％。調(diào)查結(jié)果表明，此次分離的蛔蟲(chóng)屬于豬蛔蟲(chóng)。本研究是首次通過(guò)藏豬蛔蟲(chóng)三個(gè)線粒體基因片段nad1、

5、cox1、cox2進(jìn)行分離、鑒定和分子標(biāo)記。
　　3.藏豬細(xì)頸囊尾蚴病流行病學(xué)調(diào)查及cox2基因擴(kuò)增及序列分析
　　本研究以西藏林芝地區(qū)屠宰藏豬體內(nèi)分離出來(lái)的細(xì)頸囊尾蚴為研究對(duì)象，用ELISA和PCR方法，首次擴(kuò)增藏豬細(xì)頸囊尾蚴的cox2基因序列，并對(duì)擴(kuò)增后陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序和序列分析，以鑒定藏豬蛔蟲(chóng)的種類。結(jié)果顯示:藏豬細(xì)頸囊尾蚴的血清抗體陽(yáng)性率平均為43.93％(2014:42.86％;2015:45.35％)，其中公豬和

6、母豬的陽(yáng)性率分別為43.39％，44.56％，不同年齡段的藏豬細(xì)頸囊尾蚴的陽(yáng)性率范圍為30.20％～63.79％，結(jié)果顯示:本次分離到細(xì)頸囊尾蚴株與甘肅、青海和四川分離株具有很大的相似性。本研究是首次通過(guò)對(duì)藏豬細(xì)頸囊尾蚴進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和cox2基因進(jìn)行分離和鑒定，旨在為西藏地區(qū)藏豬細(xì)頸囊尾蚴的防治提供流行病學(xué)和分子生物學(xué)數(shù)據(jù)。
　　4.藏豬蛔蟲(chóng)、細(xì)頸囊尾蚴線粒體基因組序列測(cè)定與分析
　　本試驗(yàn)對(duì)藏豬蛔蟲(chóng)、細(xì)頸囊尾蚴的線粒體

7、DNA進(jìn)行提取、建庫(kù)和測(cè)序、功能注釋和生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:豬蛔蟲(chóng)線粒體基因組大小為14128bp，編碼基因12個(gè)(cox1-3，nad1-6，nad4L，atp6，cytb)、rRNA2個(gè)(rrnL、rrnS)、tRNA35個(gè);細(xì)頸囊尾蚴線粒體基因組大小為13607 bp，編碼基因12個(gè)(cox1-3，nad1-6，nad4L，atp6，cytb)、rRNA2個(gè)（rrnL，rrnS）、tRNA22個(gè)。豬蛔蟲(chóng)、細(xì)頸囊尾蚴線粒體基因堿

8、基A、T含量明顯高于C、G含量，分別為71.74％和70.90％。豬蛔蟲(chóng)、細(xì)頸囊尾蚴線粒體基因密碼子分別為4385（不含終止密碼子304個(gè)）和4194個(gè)（不含終止密碼子341個(gè)）。兩者密碼子種類均為63個(gè)，TTT使用最多，分別為15.51％和10.44％;蛔蟲(chóng)最少的為CAA(0.05％)、CGC(0.05％)，細(xì)頸囊尾蚴最少的為CGC(0.05％)。均翻譯20種氨基酸，豬蛔蟲(chóng)苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸比例最高，為17.13％、16.03％

9、、10.86％;細(xì)頸囊尾蚴為亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸比例最高，為16.48％、11.76％、11.06％。豬蛔蟲(chóng)氨基酸比列最低的為谷氨酰胺(0.73％)、組氨酸(0.62％);細(xì)頸囊尾蚴氨基酸比列最低的為谷氨酰胺(1.29％)、色氨酸(1.67％)、丙氨酸(1.81％)。進(jìn)化分析表明:藏豬蛔蟲(chóng)與人蛔蟲(chóng)（NC-016198.1）同源性高達(dá)99％;與X54253.1同源性高達(dá)99％;與中國(guó)湛江分離蟲(chóng)體（登錄號(hào)為HQ704901.1）同源性為

10、98％。該結(jié)果與之前報(bào)道的人蛔蟲(chóng)與豬蛔蟲(chóng)高度同源結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了二者可能為同一種蟲(chóng)體。藏豬細(xì)頸囊尾蚴與參考的甘肅分離株（登錄號(hào):GQ228819.1）同源性均高達(dá)99％。
　　綜上所述，本研究通過(guò)對(duì)西藏藏豬消化道寄生蟲(chóng)流行病學(xué)調(diào)查以及2種常見(jiàn)寄生蟲(chóng)（蛔蟲(chóng)、細(xì)頸囊尾蚴）進(jìn)行線粒體基因組學(xué)研究，較為全面了解藏豬常見(jiàn)消化道寄生蟲(chóng)的流行情況，并通過(guò)對(duì)其進(jìn)行分離鑒定及線粒體基因組測(cè)序，這對(duì)于了解藏豬寄生蟲(chóng)的分離鑒定、進(jìn)化分析，種內(nèi)遺傳