Three Dimensional Structure of 2A Protenaise from Enterovirus 71.pdf

1、腸道病毒71型(Enterovirus-71，EV-71)屬于小核糖核酸病毒科。EV-71是手足口病(Hand，footandmouthdisease，HFMD)的主要病因，也能導致干細胞腦炎和其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥(centralnervoussystemcomplications，CNS)，最終可能在兒童中引起致命的結果。目前還沒有能有效預防和治療EV-71感染的疫苗或抗病毒藥物。EV-71的基因組只有一個大的開放閱讀框，編碼一個多

2、聚蛋白前體。對這個多聚蛋白前體進行切割產(chǎn)生的功能性蛋白對病毒的復制有重要作用。這些切割是由兩個病毒蛋白酶介導的，這兩個酶分別叫做2A蛋白酶(2Apro)和3C蛋白酶(3Cpr)。2Apro能夠從非結構蛋白中切出結構性蛋白，另外，此蛋白酶也能切割真核翻譯起始因子4G(eukaryotictranslationinitiationfactor4G，eIF4G)及其他宿主因子。因為具有單一的結構和功能特征，所以2Apro被認為是抵抗EV-71

3、病毒的一個優(yōu)良靶點。因此，解析這個蛋白酶的結構具有重要意義。本文中，我們在1.70(A)的分辨率下解出了一顆EV-71病毒2Apro晶體的三維結構。我們首先將2Apro構建到pGEX-4T-1載體中并在E.coli中得到了高產(chǎn)量表達的帶GST標簽的融合蛋白。使用親和層析技術純化融合蛋白后，利用凝血酶thrombin切除GST標簽，進一步使用凝膠過濾層析技術純化得到了重組蛋白。在篩選了大約1000多個結晶條件并對有效條件進行了進一步優(yōu)化后