戊四氮點(diǎn)燃腺苷A1受體敲除小鼠多藥轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)及其與COX-2的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：觀察腺苷A1 受體基因缺陷對(duì)PTZ 點(diǎn)燃小鼠癲癇發(fā)作及其腦組織病理形態(tài)學(xué)的影響，探討腺苷A1 受體與癲癇發(fā)作及神經(jīng)保護(hù)的關(guān)系。
　　 方法：將實(shí)驗(yàn)小鼠分為敲除鼠組（腺苷A1 受體基因敲除小鼠，n=20只）、野生型組（C57BL/6 型普通小鼠，n=20只）和對(duì)照組（未接受PTZ 點(diǎn)燃的野生型小鼠，n=10只），采用PCR法對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行基因鑒定并據(jù)此分組，觀察各組小鼠在PTZ 點(diǎn)燃過程中的癲癇發(fā)作情

2、況（死亡率、點(diǎn)燃率；點(diǎn)燃潛伏時(shí)間、發(fā)作開始時(shí)間、發(fā)作持續(xù)時(shí)間；癲癇發(fā)作級(jí)別的數(shù)量等），并在PTZ 點(diǎn)燃后不同時(shí)間點(diǎn)（24h,30d）處死小鼠，對(duì)其冰凍切片進(jìn)行HE 染色和Nissl 染色觀察皮層和海馬的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：敲除鼠組死亡率和點(diǎn)燃率均顯著高于野生型組，兩組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；敲除鼠組點(diǎn)燃潛伏時(shí)間、發(fā)作開始時(shí)間明顯短于野生型組，發(fā)作持續(xù)時(shí)間明顯長(zhǎng)于野生型組，兩組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；敲除鼠組癲癇發(fā)作程度明顯重于野

3、生型組。點(diǎn)燃后不同時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物腦組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示敲除鼠組損傷較野生型組出現(xiàn)更早、范圍更廣泛、損傷程度更重。主要表現(xiàn)為早期反應(yīng)性小膠質(zhì)細(xì)胞增生、細(xì)胞腫脹，晚期神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、異常增多的畸形膠質(zhì)細(xì)胞。
　　 結(jié)論：腺苷A1受體敲除鼠具有特殊的癲癇易感性，從側(cè)面證實(shí)腺苷A1受體在介導(dǎo)腺苷的抗癲癇機(jī)制中具有十分關(guān)鍵的作用；腺苷A1受體具有極強(qiáng)的腦保護(hù)作用，可減輕PTZ點(diǎn)燃過程中的腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷。
　　 第二部分

4、>　　 目的：觀察PTZ 點(diǎn)燃腺苷A1 受體敲除小鼠腦內(nèi)PGP、MRP1等MDTs的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，評(píng)價(jià)腺苷A1 受體在難治性癲癇中的作用，為難治性癲癇的治療提供新的方向。
　　 方法：采用腹腔注射PTZ 制備慢性點(diǎn)燃癲癇模型，動(dòng)物先分為野生型組（n=40只）和敲除鼠組（n=40只）兩組，再根據(jù)有無(wú)接受點(diǎn)燃及點(diǎn)燃后不同時(shí)間點(diǎn)又各自分為點(diǎn)燃前亞組、點(diǎn)燃后24h 亞組、點(diǎn)燃后7d 亞組、點(diǎn)燃后30d 亞組，采用RT-PCR法、免疫熒

5、光組織化學(xué)法觀察各組（亞組）小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：PTZ 點(diǎn)燃后24h 時(shí)，野生型組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1的表達(dá)與點(diǎn)燃前比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，敲除鼠組PGP、MRP1的表達(dá)顯著高于點(diǎn)燃前，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組小鼠點(diǎn)燃后7d、30d 時(shí)PGP、MRP1的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組；兩組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1的表達(dá)點(diǎn)燃后30d時(shí)顯著高于7d 時(shí)，點(diǎn)燃后7d 時(shí)顯著高于24

6、h 時(shí)，說明PTZ 點(diǎn)燃后PGP、MRP1的表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高；PTZ 點(diǎn)燃后同一時(shí)間點(diǎn)（點(diǎn)燃后24h、點(diǎn)燃后7d、點(diǎn)燃后30d）敲除鼠組PGP、MRP1的表達(dá)均顯著高于野生型組。
　　 結(jié)論：腺苷A1 受體激活可下調(diào)PGP、MRP1等MDTs的表達(dá)，推測(cè)腦內(nèi)腺苷局部給藥可能成為控制難治性癲癇的有效方法。
　　 第三部分
　　 目的：觀察塞來(lái)昔布對(duì)PTZ 點(diǎn)燃腺苷A1 受體敲除小鼠癲癇發(fā)作、腦組織病理形態(tài)學(xué)變化

7、及腦內(nèi)PGP、MRP1、COX-2表達(dá)的影響，分析COX-2與癲癇發(fā)作及神經(jīng)保護(hù)的關(guān)系，探討COX-2與癲癇耐藥性產(chǎn)生的相關(guān)性及其可能機(jī)制。
　　 方法：采用腹腔注射PTZ 制備慢性點(diǎn)燃癲癇模型，未接受PTZ 點(diǎn)燃的腺苷A1 受體敲除鼠為對(duì)照組（n=10只），接受PTZ 點(diǎn)燃的腺苷A1 受體敲除鼠根據(jù)是否給予塞來(lái)昔布預(yù)治療分為干預(yù)組（n=20只）和非干預(yù)組（n=20只）兩組，觀察各組小鼠在PTZ 點(diǎn)燃過程中的癲癇發(fā)作情況（點(diǎn)燃潛

8、伏時(shí)間、發(fā)作開始時(shí)間、發(fā)作持續(xù)時(shí)間）；再根據(jù)PTZ 點(diǎn)燃后不同時(shí)間點(diǎn)將干預(yù)組和非干預(yù)組兩組分別分為點(diǎn)燃后24h 亞組、點(diǎn)燃后30d亞組，采用HE 染色觀察各組（亞組）皮層和海馬的形態(tài)結(jié)構(gòu)。采用RT-PCR法、免疫熒光組織化學(xué)法觀察各組（亞組）小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：干預(yù)組點(diǎn)燃潛伏時(shí)間、發(fā)作開始時(shí)間明顯長(zhǎng)于非干預(yù)組，發(fā)作持續(xù)時(shí)間明顯短于非干預(yù)組，兩組比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。點(diǎn)燃后不同

9、時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物腦組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示干預(yù)組皮層及海馬損傷程度較非干預(yù)組輕。點(diǎn)燃后24h 時(shí)，非干預(yù)組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而干預(yù)組與對(duì)照組比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，點(diǎn)燃后30d時(shí)，兩組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2的表達(dá)顯著高于對(duì)照組；干預(yù)組和非干預(yù)組小鼠大腦皮層和海馬PGP、MRP1、COX-2的表達(dá)點(diǎn)燃后30d 時(shí)顯著高于24h 時(shí)，說明PTZ 點(diǎn)燃后COX