人心肌特異的新蛋白激酶p93在心臟發(fā)育、結(jié)構(gòu)性心臟病中的功能與機(jī)制研究.pdf

1、該研究在構(gòu)建成人心臟cDNA文庫并進(jìn)行新ESTs（expressed sequence tags）分離的基礎(chǔ)上,綜合數(shù)據(jù)庫及生物信息學(xué)分析,克隆出某些與心血管系統(tǒng)疾病相關(guān)的基因,并進(jìn)一步進(jìn)行功能鑒定.該文介紹其中兩條新全長(zhǎng)cDNA,即心肌特異的蛋白激酶p93和肌組織特異的細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)蛋白NELIN,現(xiàn)將主要研究結(jié)果概述如下：一、我們?cè)?p31-p21的房室間隔缺損區(qū)克隆到一新的蛋白激酶基因（GenBank ac.AF116826）該基因

2、cDNA全長(zhǎng)約3420bp,含一個(gè)2505bp的完整閱讀框,可編碼835個(gè)氨基酸分子量約為93kD的蛋白質(zhì),故將其命名為p93.結(jié)構(gòu)域分析表明p93含三種結(jié)構(gòu)域：N端為7個(gè)錨蛋白重復(fù)（ankyrin repeats）結(jié)構(gòu)域,中間為一激酶結(jié)構(gòu)域,C末端為富含絲氨酸結(jié)構(gòu)域.同源性分析提示p93為整合素連接激酶（integrin-linked kinase,ILK）的遠(yuǎn)源同源基因.種系發(fā)生分析發(fā)現(xiàn)p93與ILK等可能同屬M(fèi)APKKKs家族成員

3、.二、NELIN（Nexilin-like ptotein）（GenBank ac.AF114264）,cDNA全長(zhǎng)2736bp,含一1344bp的開放讀碼框,與大鼠Nexilin高度相似.胎兒6種及成人8種組織Northern blot雜交顯示：1）NELIN僅在心臟和骨骼肌中表達(dá),至少有2.7和4.0kb兩種轉(zhuǎn)錄本.胎兒和成人心臟中兩種轉(zhuǎn)錄本均表達(dá),以4.0kb轉(zhuǎn)錄本表達(dá)豐度最高,2.7kb轉(zhuǎn)錄本次之.其中2.7kb轉(zhuǎn)錄本與我們所得

4、克隆的長(zhǎng)度相符.骨骼肌中僅表達(dá)4.0kb轉(zhuǎn)錄本.2）表達(dá)有時(shí)空特異性.4.0kb轉(zhuǎn)錄本在胎兒期心臟中的表達(dá)豐度是骨骼肌的3.4倍,至成人期,該轉(zhuǎn)錄本在骨骼肌中的表達(dá)反而高于心臟1.1.另外2.7kb轉(zhuǎn)錄本幾乎不在胎兒心臟表達(dá).RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因在心臟、動(dòng)脈和靜脈中表達(dá).查詢基因組數(shù)據(jù)庫,該基因定位在染色體1p31.1.以上結(jié)果顯示,NELIN是一個(gè)肌組織（心肌、骨骼肌和平滑?。┨禺惐磉_(dá)的基因,其中2.7kb轉(zhuǎn)錄本是心肌特異的,這