白念珠菌蛋白激酶Gin4的功能與結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、白念珠菌是一種條件性致病真菌，寄存在人體內(nèi)，與健康菌群共生，但在一些情況下，會(huì)引起疾病。我們主要研究白念珠菌一些基因功能及其結(jié)構(gòu)。
　　Gin4蛋白屬于NIM1蛋白激酶家族，是非常重要的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)器。GIN4基因主要分為N端激酶區(qū)和C端非激酶區(qū)，激酶區(qū)功能及結(jié)構(gòu)已被研究非常通透;但對(duì)于C端的研究比較少。根據(jù)一些研究，發(fā)現(xiàn)該基因有三個(gè)不同的結(jié)合域:脂質(zhì)結(jié)合域(LBD)，隔膜蛋白結(jié)合域(SBD)和核仁結(jié)合域(NAD)。隔膜蛋白結(jié)合域

2、(SBD)是Gin4蛋白功能中一項(xiàng)必不可少的結(jié)構(gòu)域，我們本次實(shí)驗(yàn)主要研究該區(qū)域功能。我們將要研究區(qū)域截取幾段，與不同標(biāo)簽載體連接，之后利用不同標(biāo)簽特異性吸附達(dá)到初步純化目的，再利用離子交換、分子篩等方法獲得純度較高，均一性較好的蛋白。最后，將得到目的蛋白，利用蛋白晶體初篩試劑盒初篩蛋白晶體，再在此基礎(chǔ)上優(yōu)化，使之得到想要的蛋白結(jié)構(gòu)。
　　蛋白功能方面，本次實(shí)驗(yàn)主要涉及了4個(gè)蛋白，分別是Gin4蛋白，Sec15蛋白，Bem1蛋白，R

3、sr1蛋白。在釀酒酵母中，SEC15基因和眾多基因一起組成胞吐復(fù)合物結(jié)構(gòu)，在營養(yǎng)吸收，與外界環(huán)境溝通，分裂和維護(hù)細(xì)胞基本形狀是至關(guān)重要。Rsr1蛋白是一種GTP酶，是一種芽位點(diǎn)蛋白，是一種Ras超家族中一員。Bem1蛋白在細(xì)胞極性和出芽功能方面存在作用，Gin4蛋白是一種隔膜蛋白相關(guān)蛋白，在細(xì)胞分離方面起作用。這幾個(gè)蛋白在白念珠菌中都有表達(dá)，且與極性有關(guān)。本次實(shí)驗(yàn)主要通過蛋白之間體外相互作用，即利用標(biāo)簽抗體特異性，通過WesternBl