牦牛子宮內(nèi)膜腺上皮和基質(zhì)細胞的分離培養(yǎng)和鑒定.pdf

1、為了建立牦牛子宮內(nèi)膜腺上皮和基質(zhì)細胞的體外分離及培養(yǎng)體系，并確定二者的特異性標(biāo)記物，本研究首次對泛角蛋白(CKs)、角蛋白7(CK7)、波形蛋白(Vimentin)和平滑肌肌動蛋白(Actin)在未妊娠和妊娠30天左右的牦牛子宮的表達及牦牛子宮內(nèi)膜腺上皮和基質(zhì)細胞的分離培養(yǎng)體系進行了研究。研究結(jié)果顯示：未妊娠時，泛角蛋白在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞、腔上皮細胞內(nèi)表達，波形蛋白在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞內(nèi)表達，平滑肌肌動蛋白在子宮平滑肌和血管平滑肌內(nèi)表達

2、，牦牛子宮任何部位均不表達角蛋白7；妊娠30天左右時，泛角蛋白在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞、子宮內(nèi)膜腔上皮細胞、滋養(yǎng)層細胞、內(nèi)胚層細胞和尿囊細胞內(nèi)表達，波形蛋白在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和內(nèi)胚層細胞內(nèi)表達，平滑肌肌動蛋白在子宮平滑肌和血管平滑肌內(nèi)表達，角蛋白7在尿囊細胞內(nèi)表達，偶爾在腔上皮細胞的細胞核邊緣表達；消化法進行原代培養(yǎng)時，組織經(jīng)膠原酶消化并通過100目和400目篩網(wǎng)組合可以有效地分離原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細胞；分離得到的子宮內(nèi)膜

3、基質(zhì)細胞活率達90﹪以上，并可在體外傳代7次以上；分離得到的子宮內(nèi)膜腺上皮細胞活率可達85﹪以上，并可在體外傳代5次以上；RPMI1640培養(yǎng)基最適合子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的生長，維持子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞正常生長的FBS添加量為20﹪，維持子宮內(nèi)膜腺上皮細胞正常生長的胎牛血清添加量為30﹪。對分離得到的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細胞進行免疫組織化學(xué)標(biāo)記的結(jié)果顯示在體外子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞表達泛角蛋白，子宮內(nèi)膜腺上皮細胞表達波