牦牛子宮內(nèi)膜腺上皮和基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定.pdf

1、為了建立牦牛子宮內(nèi)膜腺上皮和基質(zhì)細(xì)胞的體外分離及培養(yǎng)體系，并確定二者的特異性標(biāo)記物，本研究首次對(duì)泛角蛋白(CKs)、角蛋白7(CK7)、波形蛋白(Vimentin)和平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)在未妊娠和妊娠30天左右的牦牛子宮的表達(dá)及牦牛子宮內(nèi)膜腺上皮和基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)體系進(jìn)行了研究。研究結(jié)果顯示：未妊娠時(shí)，泛角蛋白在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、腔上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，波形蛋白在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，平滑肌肌動(dòng)蛋白在子宮平滑肌和血管平滑肌內(nèi)表達(dá)

2、，牦牛子宮任何部位均不表達(dá)角蛋白7；妊娠30天左右時(shí)，泛角蛋白在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞、子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞、滋養(yǎng)層細(xì)胞、內(nèi)胚層細(xì)胞和尿囊細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，波形蛋白在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)胚層細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，平滑肌肌動(dòng)蛋白在子宮平滑肌和血管平滑肌內(nèi)表達(dá)，角蛋白7在尿囊細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，偶爾在腔上皮細(xì)胞的細(xì)胞核邊緣表達(dá)；消化法進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)，組織經(jīng)膠原酶消化并通過(guò)100目和400目篩網(wǎng)組合可以有效地分離原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞；分離得到的子宮內(nèi)膜

3、基質(zhì)細(xì)胞活率達(dá)90﹪以上，并可在體外傳代7次以上；分離得到的子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞活率可達(dá)85﹪以上，并可在體外傳代5次以上；RPMI1640培養(yǎng)基最適合子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，維持子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞正常生長(zhǎng)的FBS添加量為20﹪，維持子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞正常生長(zhǎng)的胎牛血清添加量為30﹪。對(duì)分離得到的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)標(biāo)記的結(jié)果顯示在體外子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)泛角蛋白，子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞表達(dá)波