可緩釋血管內(nèi)皮生長因子的聚乳酸—聚乙醇酸支架及與血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞相容性研究.pdf

1、實驗背景及目的
　　目前組織工程產(chǎn)物已經(jīng)在皮膚、骨的修復(fù)重建等領(lǐng)域開始了臨床應(yīng)用，而血管組織工程的目標(biāo)就是構(gòu)建有生物活性的、能夠用于臨床治療的血管移植物。目前國內(nèi)外已經(jīng)進(jìn)行了較多的研究以期研制出無免疫原性，抗血栓形成、組織和細(xì)胞相容性高，具有一定強度和生長性并能廣泛應(yīng)用于臨床的血管替代物，以期解決臨床上治療血管狹窄或閉塞導(dǎo)致的缺血性疾病自體血管移植及血管來源有限的問題。
　　組織工程血管大規(guī)模用于臨床，必須找到一種快速，精確

2、，廉價設(shè)計加工支架的方法。目前快速成型技術(shù)的成熟無疑給我們帶來了希望?？焖俪尚图夹g(shù)(Rapidprototyping，RP)最早出現(xiàn)于1986年并首先應(yīng)用于航天工業(yè)，1992年，考慮到利用RP技術(shù)可制備微觀結(jié)構(gòu)可調(diào)的物件，Cima等首次嘗試將快速成型技術(shù)應(yīng)用于具有藥物釋放功能的聚丙交酯支架的制備，開創(chuàng)了利用RP技術(shù)制備組織工程支架的先河。聚乳酸一聚乙醇酸(PLGA)是目前最常采用的組織工程血管支架材料之一，制備可緩釋血管內(nèi)皮生長因子（V

3、EGF）的可降解聚乳酸一聚乙醇酸(PLGA)支架（VEGF-PLGA）的方法簡便可行。有研究提示緩釋微球載體可使半衰期較短的生長因子長期持續(xù)釋放。而以明膠微球作為緩釋載體，加載VEGF和PLGA復(fù)合構(gòu)建組織工程血管支架方面的研究還很少。本實驗旨在探討一種可緩釋血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的可降解聚乳酸一聚乙醇酸(PLGA)支架的制備方法以及與血管平滑肌細(xì)胞（SMC）的細(xì)胞相容性，為具生物活性的組織工程血管支架的應(yīng)用研究提供依據(jù)。

4、　　實驗方法
　　第一部分：可緩釋血管內(nèi)皮生長因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架的構(gòu)建。以明膠微球作為緩釋載體，加載VEGF和PLGA復(fù)合構(gòu)建組織工程血管支架（VEGF-PLGA）并考察體外釋放效果。
　　第二部分：平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定以及它和VEGF-PLGA的相容性研究。體外培養(yǎng)的大鼠肺主動脈第5代或第6代SMC細(xì)胞分為三組：可緩釋血管內(nèi)皮生長因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸（VEGF-PLGA）組、聚乳酸-聚乙醇酸（PLG

5、A）組與對照組。分別種植在VEGF-PLGA膜片上，PLGA膜片上，對照組不放置膜片。用相差顯微鏡觀察細(xì)胞的生長情況，繪制細(xì)胞生長曲線，檢測細(xì)胞毒力和細(xì)胞黏附率，并用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布。
　　實驗結(jié)果
　　1、VEGF在體外釋放達(dá)14天以上。
　　2、SMC在VEGF-PLGA膜片上生長良好。
　　3、MTT法檢測細(xì)胞在VEGF-PLGA的增殖情況顯示，明顯好于其它組（P＜0.05），細(xì)胞增殖符合細(xì)胞生長