廣州地區(qū)獻(xiàn)血人群人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒感染情況的調(diào)查及其與安全輸血關(guān)系的研究.pdf

1、【目的】 在獻(xiàn)血者常規(guī)篩查工作的基礎(chǔ)上，對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒Ⅰ型或Ⅱ型(HTLV- Ⅰ/Ⅱ)抗體檢測，同時(shí)追蹤調(diào)查受血者輸血前后HTLV感染情況，以了解廣州地區(qū)獻(xiàn)血人群HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染情況和輸血傳播HTLV的風(fēng)險(xiǎn)度，對(duì)用蛋白印跡法(WB)檢測陽性者用PCR法進(jìn)行擴(kuò)增，以測定HTLV基因序列，比較廣州地區(qū)HTLV的基因序列與其他代表株的同源性，為探討HTLV與安全輸血的關(guān)系和是否對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ檢測

2、作為常規(guī)檢測項(xiàng)目提供重要的參考數(shù)據(jù)，為預(yù)防輸血傳播疾病提供重要依據(jù)。 【方法】 1．采?。篍LISA法檢測廣州血液中心9000例無償獻(xiàn)血者HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體。 2．對(duì)200名受血者進(jìn)行HTLV Ⅰ/Ⅱ抗體檢測，再平均分成兩組，第一組輸注已經(jīng)HTLV/II抗體篩查的血液，第二組輸注未經(jīng)HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查的血液，1個(gè)月后采取ELISA法檢測兩組受血者輸血后HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體。 3．HTLV- Ⅰ/Ⅱ

3、抗體ELISA法檢測陽性者用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試，雙孔復(fù)試陽性者用蛋白印跡法(WB)進(jìn)行確證。 4．WB確證陽性者重新采集樣本5ml，EDTA抗凝，加入Ficoll-Hypaque溶液分離淋巴細(xì)胞。 5．分離后的淋巴細(xì)胞采用TakaRa公司的DNA抽取試劑盒抽取HTLV-Ⅰ前病毒DNA。 6．設(shè)計(jì)合成兩對(duì)引物(env區(qū)和LTR區(qū))。 7．對(duì)2例陽性標(biāo)本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 8．應(yīng)用測序儀對(duì)PCR陽性產(chǎn)物

4、進(jìn)行DNA測序。 【結(jié)果】 1．9000例無償獻(xiàn)血者標(biāo)本有10例HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體ELISA初篩呈陽性反應(yīng)，再用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試只有2例陽性，陽性率為0.02％(2/9000)。 2．200名受血者輸血前后HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體均為陰性。 3．這2例陽性標(biāo)本用WB進(jìn)行確證，兩者均為HTLV-Ⅰ型血清反應(yīng)陽性。 4．2例陽性標(biāo)本PCR檢測均在720bp(env區(qū))和501bp(LTR 區(qū))處出現(xiàn)反

5、應(yīng)帶。 5．測序結(jié)果：兩例陽性標(biāo)本與HTLV-Ⅰ型WHP代表株同源性分別為： 標(biāo)本1:env區(qū)99.3％：LTR區(qū)99.0％。 標(biāo)本2:env區(qū)99.4％：LTR區(qū)99.2％。 【結(jié)論】 1．廣州地區(qū)獻(xiàn)血人群HTLV感染率尚處于一個(gè)較低的水平。 2．200名受血者未出現(xiàn)因輸血而感染HTLV的情況，說明廣州地區(qū)通過輸血傳播HTLV的風(fēng)險(xiǎn)還處于較低的水平。 3．廣州地區(qū)獻(xiàn)血人群2例陽性