兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、第一部分、相關(guān)癌基因、抑癌基因在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)和臨床意義
　　目的：探討癌基因MDM2，抑癌基因PTEN、P53以及PI3K、AKT基因在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)及其臨床意義。
　　方法：收集11例骨髓正常非白血病患者（正常對(duì)照normal control,NC），18例初診急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者，27例完全緩解期急性淋巴細(xì)胞白血病(a

2、cute lymphoblastic leukemia in complete remission，ALL-CR)患者的骨髓標(biāo)本，分離單個(gè)核細(xì)胞（marrow mononuclear cells，MMNC），應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantification reverse transcriptional PCR，RT-PCR）檢測(cè)MMNC中MDM2、PTEN、P53、PI3K和AKT mRNA的表達(dá)水平，蛋白質(zhì)免

3、疫印跡(Western Blot,WB）方法檢測(cè)MDM2、PTEN、P53、PI3K、AKT和p-AKT蛋白的表達(dá)水平，并分析這些基因的mRNA和蛋白的表達(dá)與臨床的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.MDM2、PTEN、P53、PI3K和AKT的mRNA在ALL中的表達(dá)水平
　　1.1 MDM2 mRNA在初診ALL組的表達(dá)水平（0.826±0.559）明顯高于NC組（0.411±0.056）(P<0.05)。
　　1.

4、2 PTEN mRNA在初診ALL組（1.281±0.923）和ALL-CR組（1.984±0.383）的表達(dá)水平明顯低于NC組（6.124±0.794）(P值均<0.01)。
　　1.3 P53 mRNA在初診ALL組(0.277±0.087)和ALL-CR組（0.319±0.067）的表達(dá)水平明顯低于NC組（2.404±0.533）(P值均<0.05)。
　　1.4 PI3K、AKT mRNA在NC組、初診ALL組和AL

5、L-CR組中表達(dá)無(wú)差異。
　　2.MDM2、PTEN、P53、PI3K、AKT和p-AKT蛋白在ALL中的表達(dá)水平.
　　2.1 MDM2蛋白在ALL-CR組的表達(dá)水平（2.535±0.229）高于NC組（1.495±0.336）(P<0.05)；在初診ALL組（2.175±0.219）高于NC組（1.495±0.336），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.2 PTEN蛋白在初診ALL組（0.513±0.061）和ALL-

6、CR組（0.458±0.043）的表達(dá)水平明顯低于NC組（0.981±0.089）(P值均<0.01)。
　　2.3 P53蛋白在ALL-CR組的表達(dá)水平（1.937±0.178）高于NC組（1.209±0.183）(P<0.05)；在初診ALL組（1.853±0.178）高于NC組（1.209±0.183），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.4 PI3K蛋白ALL-CR組中的表達(dá)水平（2.968±0.294）明顯高于NC組（1

7、.706±0.263）(P<0.01)；在初診ALL組（2.339±0.251）高于NC組（1.706±0.263），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.5 AKT蛋白在初診ALL組（2.943±0.261）(P<0.05)和ALL-CR組（3.699±0.389）(P<0.01)的表達(dá)水平明顯高于NC組（1.762±0.336）。
　　2.6 p-AKT蛋白在初診ALL組（2.682±0.321）(P<0.05)和ALL-CR組

8、（3.251±0.349）(P<0.01)的表達(dá)水平明顯高于NC組（1.366±0.252）。
　　結(jié)論：初診的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒中，在mRNA水平上,其腫瘤細(xì)胞的癌基因MDM2高表達(dá)，抑癌基因PTEN、P53低表達(dá)；在翻譯水平上，AKT和p-AKT蛋白高表達(dá)，PTEN蛋白低表達(dá)。這些癌基因和抑癌基因的異常表達(dá)可能是急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病的重要原因。
　　第二部分、柔紅霉素聯(lián)合鹽酸小檗堿對(duì)原代急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖抑

9、制的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探討柔紅霉素（daunorubicin,DNR）聯(lián)合鹽酸小檗堿（berberine,BBR）對(duì)原代急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞（primary acute lymphoblastic leukemia cells,P-ALLCS）增殖的影響。
　　方法：收集初診的急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患兒骨髓標(biāo)本6例，分離單個(gè)核細(xì)胞，于24小時(shí)采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑

10、盒（cell counting kit-8 assay，CCK-8）檢測(cè)DNR和BBR分別單藥作用和兩藥聯(lián)合作用對(duì)P-ALLCS的增殖抑制作用。
　　結(jié)果：
　　1.DNR對(duì)P-ALLCS的生長(zhǎng)抑制作用
　　DNR0.05 mg/L,0.1mg/L,0.5mg/L,1mg/L四個(gè)濃度作用于P-ALLCS，抑制率分別是(11.56±0.73％)，(26.16±2.91%)，(39.91±1.88%)，(59.60±2.8

11、0%)，隨著DNR濃度的增加，P-ALLCS被抑制的比例逐漸增加，且P值均<0.05。
　　2.BBR對(duì)P-ALLCS的生長(zhǎng)抑制作用
　　BBR10μ M,50μ M,100μ M三個(gè)濃度作用于P-ALLCS，抑制率分別是（12.39±1.5%），（25.61±3.00%），（39.75±2.43%），隨著B(niǎo)BR濃度的增加，P-ALLCS的被抑制的比例逐漸增加，且P值均<0.05。
　　3.DNR聯(lián)合BBR對(duì)P-ALL

12、CS的生長(zhǎng)抑制作用
　　3.1 DNR0.05mg/L聯(lián)合BBR10μM,50μM,100μM的抑制率分別是（18.43±1.11%）,（30.77±2.53%），（46.58±3.06%）。
　　3.2 DNR0.1mg/L聯(lián)合BBR10μM,50μM,100μM的抑制率分別是（27.25±1.93%），（38.65±1.68%），（53.12±3.13%）。
　　3.3 DNR0.5mg/L聯(lián)合BBR10μM,50

13、μM,100μM的抑制率分別是（46.67±1.64%），（71.91±5.08%），（79.32±1.60%）。
　　3.4 DNR1mg/L聯(lián)合BBR10μM,50μM,100μM的抑制率分別是（70.85±0.93%），（80.28±1.98%），（89.96±1.40%）。
　　在以上四個(gè)組別中，隨著B(niǎo)BR濃度的增加，對(duì)P-ALLCS的增殖抑制作用逐漸增強(qiáng)，P值均<0.05。而且每一組別中DNR聯(lián)合BBR后的抑制率比