miR-221在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和細(xì)胞定位研究.pdf

1、miR-221在人肝細(xì)胞癌和其他癌癥中都曾被報(bào)導(dǎo)上調(diào)表達(dá)。它有一個(gè)已經(jīng)被證實(shí)的靶基因p27Kip1,這個(gè)基因下調(diào)會(huì)影響HCC的預(yù)后。為了評(píng)價(jià)在肝細(xì)胞癌中miR-221和其靶基因p27KiP1的相關(guān)性,我們利用包含100例肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本的組織芯片分別進(jìn)行了針對(duì)miR-221的原位雜交實(shí)驗(yàn)和p27Kip1的免疫組化實(shí)驗(yàn)。原位雜交實(shí)驗(yàn)揭示miR-221僅在胞漿分布,在癌組織和癌旁組織中的陽(yáng)性率分別為83％和24％,P<0.01

2、,具有顯著差異。且它的高表達(dá)與腫瘤大小和轉(zhuǎn)移相關(guān)。免疫組化實(shí)驗(yàn)揭示p27Kip1在肝細(xì)胞癌的胞漿和炎癥細(xì)胞的胞核中分布,在癌旁組織中則僅在胞漿中分布。p27Kip1在癌組織和癌旁組織中的陽(yáng)性率分別為28％和81％,P<0.01,具有顯著差異。且它的低表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。而p27Kip1蛋白表達(dá)和miR-221表達(dá)的相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示在肝細(xì)胞癌中兩者具有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。熒光定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)miR-22l的高表達(dá)與p27 K

3、ip1的低表達(dá)與肝細(xì)胞癌的臨床分期顯著相關(guān),且印證了miR-221的高表達(dá)與p27Kip1的低表達(dá)與肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移相關(guān)的結(jié)論。p27Kip1mRNA與miR-221表達(dá)的相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果亦顯示在肝細(xì)胞癌中兩者具有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果清晰地顯示了p27Kip1蛋白水平隨著臨床分期的增加而下降,且其在轉(zhuǎn)移癌組織中的表達(dá)量比非轉(zhuǎn)移癌組織中更低。綜上所述,我們認(rèn)為mig-221在肝細(xì)胞癌中具有致癌作用,它是通過(guò)下調(diào)細(xì)

4、胞周期蛋白激酶的抑制劑的表達(dá)水平從而促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)。由于miR-221在肝細(xì)胞癌中的陽(yáng)性率高達(dá)83％,且具有致癌作用,因此本研究的結(jié)果可既為開(kāi)展針對(duì)miR-221設(shè)計(jì)病理診斷指標(biāo),又可為針對(duì)miR-221設(shè)計(jì)抑制其表達(dá)的肝細(xì)胞癌治療策略提供理論依據(jù)。 信號(hào)通路的異常激活與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān),PTCH(PTCH1)蛋白是Hedgeho信號(hào)通路的受體,在該通路的激活過(guò)程中擔(dān)任著“守門(mén)員”的角色,它是整個(gè)信號(hào)通路的感受器。近年來(lái)已

5、有研究證明,Hedgehog信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌(HCC)中處于激活狀態(tài)。為了解Hedgehog信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌(HCC)中的激活頻率以及激活機(jī)制,本研究采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)了57例肝細(xì)胞癌(HCC)組織標(biāo)本,發(fā)現(xiàn)其中38例標(biāo)本(66％)表達(dá)PTCH基因。采用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法比較了癌組織與癌旁組織中PTCH基因表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)在高分化和中分化的癌組織當(dāng)中,PTCH基因的表達(dá)高于癌旁組織,但在低分化的癌組織當(dāng)中,PTC

6、H基因的表達(dá)則低于癌旁組織。對(duì)16例肝細(xì)胞癌組織切片的免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),PTCH蛋白在9例標(biāo)本的胞漿中呈表達(dá)陽(yáng)性,陽(yáng)性率為56.3％。對(duì)16例癌旁組織切片的免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),PTCH蛋白僅在1例標(biāo)本的胞漿中呈表達(dá)陽(yáng)性,陽(yáng)性率為6.25％,癌旁組織與癌組織中PTCH蛋白表達(dá)具有顯著差異,P<0.05。本研究首次進(jìn)行了PTCH基因在肝細(xì)胞癌中的多態(tài)性分析。首先檢測(cè)了38例肝細(xì)胞癌病例中PTCH基因熱點(diǎn)突變區(qū)域的多態(tài)性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)之前報(bào)導(dǎo)

7、的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNPs)和一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的SNP A1056G。以上3個(gè)SNP分別位于6號(hào)和12號(hào)外顯子,均為同義突變。所測(cè)序列中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)非同義突變。在171例肝細(xì)胞癌病人血液標(biāo)本和162例正常人對(duì)照血液標(biāo)本中,檢測(cè)了這3個(gè)SNP位點(diǎn)的分布情況.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示:以上SNP位點(diǎn)均與HCC發(fā)生無(wú)顯著相關(guān)性。研究結(jié)果支持前人提出的Hedgehog信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌(HCC)中被頻繁激活的結(jié)論,并認(rèn)為肝細(xì)胞癌中Hedgehog信號(hào)通路