人白細胞介素21的原核表達、純化和初步應(yīng)用.pdf

1、細胞因子的研究是當(dāng)今免疫學(xué)的重要領(lǐng)域,其在科研、生產(chǎn)、臨床研究等方面都有重要作用。其中白細胞介素是在細胞間的相互作用、免疫調(diào)節(jié)以及炎癥過程中起重要作用的一類細胞因子。
　　 IL-21是2000年發(fā)現(xiàn)的,是IL-2家族的新成員。近年來研究發(fā)現(xiàn),IL-21主要由活化的CD4+細胞分泌,尤其是Th17細胞和Tfh細胞。成熟的人IL-21有4個螺旋結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)域與其它IL-2家族細胞因子結(jié)構(gòu)有較高的同源性。IL-21具有廣泛的生物學(xué)功

2、能,能有效調(diào)節(jié)NK細胞、B細胞、T細胞的增殖、發(fā)育和功能活化。IL-21在臨床研究中具有廣泛研究,主要為在研究中疾病發(fā)生機理、病程和治療的關(guān)系。然而,由于細胞因子表達、純化的限制性,IL-21在體外大量應(yīng)用及基礎(chǔ)研究仍然受到限制。
　　 本研究構(gòu)建了rhIL-21的原核表達、純化流程,獲得純度合格的目的蛋白,操作簡便、蛋白回收率高。且有效地去除了內(nèi)毒素,使其能應(yīng)用于T淋巴細胞方面實驗,具有良好的生物學(xué)活性。采用自主構(gòu)建的B細胞體

3、外培養(yǎng)系統(tǒng)進行活性評價,本研究獲得的rhIL-21能有效促進IgG抗體的分泌。與購買價格昂貴的商品化IL-21相比,本研究獲得的rhIL-21活化的具分泌高濃度抗體能力的B細胞比例更高(95％,99.4％)。
　　 研究發(fā)現(xiàn),IL-21能增強活化的抗原特異性T淋巴細胞的活性,在IGRA中的應(yīng)用可以有效增強其對結(jié)核的檢測。TB-IGRA試劑利用結(jié)核桿菌特異性T淋巴細胞檢測結(jié)核分枝感染感染。在IGRA的培養(yǎng)試劑中添加rhIL-21,