人白細胞介素22的克隆表達及功能研究.pdf

1、白細胞介素-22(IL-22)是于2000年發(fā)現(xiàn)的由激活的T細胞分泌的細胞因子，屬于IL-10家族。功能性IL-22受體復合物由IL-22R1和IL-10R2兩條受體鏈組成，IL-22通過與兩條受體鏈的結合，激活受體復合物介導的多重信號途徑，包括Januskinase信號轉導及轉錄活化蛋白(STAT)的激活劑及在肝細胞被激活的促有絲分裂蛋白激酶途徑。而與其中一個受體單獨結合時，IL-22不能介導細胞內信號轉導通路。在功能方面，IL-22

2、可以上調肝急性期蛋白表達和胰腺相關蛋白PAP1/Reg2和OPN的高表達，表明IL-22在炎癥反應中起作用；在腸上皮細胞、肺上皮細胞、神經元細胞、腎小球系膜細胞、肝細胞及黑素瘤細胞中，IL-22能激活STAT轉錄因子。它對伴刀豆球蛋白(ConA)刺激下Th2細胞的IL-4的分泌有一定的抑制作用，這對于哮喘也有潛在的治療作用。近期研究表明，IL-22是肝細胞的一個存活因子，激活的T細胞通過釋放IL-22也可以預防和修復肝損傷。 本

3、研究從CD3抗體和ConA共刺激的人外周血白細胞中提取總RNA，利用RT-PCR方法擴增得到了不含信號肽的hIL-22的基因。然后，將hIL-22基因插入pBV220載體中，構建重組質粒pBV-IL22。同時為了嘗試可溶性表達hIL-22，我們將目的基因插入pET-17b載體中，構建了重組質粒pET-IL22。將pBV-IL22分別轉化大腸桿菌DH5α、JM109、HB101，將pET-IL22轉化大腸桿菌BL21，篩選出陽性轉化菌落獲

4、得相應工程菌株，結果表明hIL-22在大腸桿菌HB101中表達量最高，可達菌體總蛋白的40％以上。目的蛋白在大腸桿菌中的表達產物以包涵體形式存在，包涵體經洗滌后以Sephacryl-300凝膠柱層析純化，目的蛋白的純度可達90％以上。純化蛋白在還原型和氧化型谷胱甘肽組成的氧化還原體系中進行復性，PEG20000濃縮，獲得了具有活性的hIL-22的純品。MTT法檢測到hIL-22對HepG2細胞有明顯的促增殖作用。利用半定量RT-PCR方

5、法初步探討了IL-22體外刺激人肝癌細胞HepG2、正常人肝細胞LO2表達c-myc和bcl-2的情況，結果發(fā)現(xiàn)IL-22促進LO2細胞中c-myc和bcl-2的表達，促進HepG2細胞中c-myc的表達。通過建立了小鼠肝損傷模型，我們初步探討了IL-22對肝臟的保護和修復作用。研究結果發(fā)現(xiàn)注射ConA誘導小鼠肝損傷血清ALT和AST明顯升高并誘導肝點狀壞死，而保護組預先注射重組IL-22的小鼠幾乎完全阻止了血清ALT和AST升高及Co