抑制素基因疫苗pCISI免疫南陽(yáng)黃牛試驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用分子克隆、基因免疫、酶免疫測(cè)定、放射免疫等技術(shù)，研究抑制素基因免疫對(duì)黃牛抗抑制素抗體產(chǎn)生、生殖及生殖內(nèi)分泌的影響，通過(guò)比較不同免疫原純度、免疫劑量和免疫次數(shù)的免疫效果，探索最佳抑制素基因免疫方案，達(dá)到有效提高動(dòng)物生殖力、降低實(shí)際成本、推廣繁育新技術(shù)的目的。本研究的主要內(nèi)容如下：1.南陽(yáng)黃牛對(duì)抑制素基因疫苗pCISI的免疫反應(yīng)性研究為分析黃牛對(duì)抑制素基因免疫的免疫反應(yīng)性及其影響因素，本實(shí)驗(yàn)采用不同劑量、不同純度的雙拷貝抑制素融合

2、質(zhì)粒pCISI免疫兩次免疫黃牛。結(jié)果表明：首次免疫10天后即產(chǎn)生了一定的抗抑制素抗體，首次免疫期間整個(gè)免疫組的抗體P/N值顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，加強(qiáng)免疫期間抗體P/N值極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，抗體陽(yáng)性牛的比例由16.83％提高到52.75％，前后差異顯著(P＜0.05)。無(wú)論是抗抑制素抗體水平還是抗體陽(yáng)性率，四個(gè)劑量組(0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg)組間均無(wú)明顯差異(p＞0.05)，其中,以3.

3、0mg劑量組產(chǎn)生的抗抑制素抗體水平最高(1.97d±0.62)，2.25mg劑量組的抗體陽(yáng)性率最高(56.62％，13/23)。高純度pCISI(OD<,260>/OD<,280>介于1.8～2.0)的免疫效果略高于低純度組OD<,260>/OD<,280>介于1.7-1.8和2.0-2.1)，但兩個(gè)純度組組間無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。結(jié)合本次研究涉及的劑量與純度，低純度組中0.75mg抑制素融合質(zhì)粒pCISI引起的免疫應(yīng)答效果最佳

4、，高純度組中2.25mg抑制素融合質(zhì)粒pCISI最佳。2.25rag和3.0mg劑量組中，高純度組的抗體陽(yáng)性率在全期顯著高于低純度組(P＜0.05)，但平均抗體P/N值無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。無(wú)論是抗體陽(yáng)性率還是抗體P/N值，其余兩劑量的高、低純度組組間在各個(gè)免疫階段均無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。研究表明，融合到乙肝表面抗原上的抑制素基因的表達(dá)產(chǎn)物在大型動(dòng)物黃牛體內(nèi)同樣具有較強(qiáng)的抑制素免疫學(xué)活性，免疫效果隨著免疫次數(shù)的增加而有所

5、提高，但并沒(méi)有完全隨著免疫原劑量的增加、純度的提高而提高。2．抑制素pCISI基因免疫對(duì)黃牛生殖及生殖內(nèi)分泌的影響 為探討抑制素基因免疫對(duì)黃牛生殖及生殖內(nèi)分泌的作用，本實(shí)驗(yàn)采用不同劑量(0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg)、不同純度(高、低)的抑制素融合質(zhì)粒pCISI兩次免疫黃牛。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫組平均每頭牛的成熟卵泡為1.99±0.99個(gè)，胎兒為1.35±0.50頭，至少具有兩個(gè)成熟大卵泡的牛的比例達(dá)61.29％，雙

6、胎率達(dá)35.14％，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。其中，2.25mg抑制素pCISI組的平均成熟卵泡數(shù)(2.35±1.23)、胎兒數(shù)(1.42±0.51)最多，雙胎率(41.67％)最大，3.0mg劑量組的雙卵率最大，達(dá)72.22％。相同時(shí)期的四個(gè)劑量組組間、OD<,260>／OD<,280>介于1.7～2.1的兩純度組組間、抗體陽(yáng)性陰性組組間，其卵泡發(fā)育、胎兒情況無(wú)顯著差異(P>0.05)。結(jié)合本次研究涉及的劑量與純度，高純度組中，

7、以1.5mg劑量組的成熟卵泡個(gè)數(shù)較多、雙卵率較大，2.25mg組的胎兒數(shù)(1.50±0.58)和雙胎率(50％)最大，四個(gè)劑量組組間無(wú)顯著差異(P>0.05)．低純度組中，2.25mg組的成熟卵泡個(gè)數(shù)(2.45±1.30)最多，顯著多于0.75mg組、3.0mg組，與1.5mg組無(wú)顯著性差異(P>0.05)；四個(gè)劑量組的雙卵率、胎兒數(shù)、雙胎率相近，組間差異不顯著(P>0.05)。各劑量組中，高純度與低純度兩種質(zhì)粒對(duì)生殖的影響差異不顯著(

8、P>0.05)。抑制素pCISI抗體水平與胎兒數(shù)、雙胎率成極顯著的正相關(guān)(P<0.01)。生殖內(nèi)分泌方面，免疫牛的FSH水平呈上升趨勢(shì)，加強(qiáng)免疫后45天僅僅0.75mg劑量組的FsH水平顯著升高(P<0.05)，各劑量組組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；首次免疫后10天雌二醇水平有所下降(P>0.05)，2.25mg組的E<,2>水平顯著高于0.75mg組，此后逐漸上升，四個(gè)劑量組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，加強(qiáng)免疫期E<,2>濃度顯著

9、高于首次免疫前和首次免疫后10天(P<0.05)；孕酮含量一直高于對(duì)照組，但差異均未達(dá)到顯著水平(P>0.05)，各時(shí)期各劑量組間P含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。結(jié)合本次研究涉及的劑量與純度，高純度組中，血清生殖激素含量(FSH、E<,2>、P)在四個(gè)劑量組組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；低純度組中，E<,2>水平僅僅在首次免疫后10天2.25mg組顯著高于0.75mg組和1.5mg組，在其它免疫期間各劑量組組間無(wú)顯著差異，F(xiàn)SH、P