抑制素基因免疫技術(shù)在家畜繁殖最新應(yīng)用進(jìn)展

1、抑制素基因免疫技術(shù)在家畜繁殖抑制素基因免疫技術(shù)在家畜繁殖中最新應(yīng)用進(jìn)展中最新應(yīng)用進(jìn)展家畜繁殖學(xué)家畜繁殖學(xué)課程論文課程論文專業(yè)：專業(yè)：班級：班級：姓名：姓名：學(xué)號：學(xué)號：日期：日期：1.31.3可通過工程菌大量繁殖且質(zhì)粒的提取相對蛋白的提取操作簡便成本低該疫苗在常溫下非常穩(wěn)定有利于儲藏運輸1.41.4質(zhì)粒DNA的理化特性相同聯(lián)合使用相互不影響。2.2.抑制素基因免疫技術(shù)的原理抑制素基因免疫技術(shù)的原理DNA疫苗進(jìn)入機(jī)體后僅少量被細(xì)胞攝取然后

2、再進(jìn)入細(xì)胞核在載體啟動子調(diào)控基因操縱下抗原基因被轉(zhuǎn)錄成mRNA該mRNA經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的核糖體翻譯成編碼抗原蛋白后有3種加工途徑分別是誘導(dǎo)MHCⅠ的CTL反應(yīng)、MHCⅡ的Th細(xì)胞活化、體液免疫。抑制素DNA疫苗通過基因免疫產(chǎn)生特異性抗抑制素抗體再通過交叉免疫中和內(nèi)源性抑制素達(dá)到調(diào)節(jié)動物生殖機(jī)能最終影響動物的繁殖力。因此對于抑制素DNA疫苗而言決定其免疫效果的是體液免疫效力而非細(xì)胞免疫效力。細(xì)胞免疫不僅沒有中和抑制素生物學(xué)活性的能力而且在

3、一定程度上還可能存在著導(dǎo)致生殖系靶細(xì)胞自身免疫損傷的危險。DNA疫苗可以引起體液免疫和細(xì)胞免疫抑制素DNA疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫對機(jī)體影響如何還未見報道。如何誘導(dǎo)抑制素DNA疫苗從細(xì)胞免疫向體液免疫偏倚是疫苗設(shè)計的關(guān)鍵。3.3.抑制素基因疫苗的構(gòu)建抑制素基因疫苗的構(gòu)建3.13.1抑制素基因疫苗的構(gòu)建的基本思路抑制素基因疫苗的構(gòu)建的基本思路基因免疫首先是目的基因的選擇一般是用選擇的試驗動物采用RTPCR方法從其睪丸組織或精液中獲取抑制素?cD

4、NA然后克隆到pGEM4的Ec位點用內(nèi)切酶上切下抑制素的可表達(dá)的基因片段插入到表達(dá)型載體質(zhì)粒與表達(dá)型的質(zhì)粒載體重組構(gòu)建成融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒根據(jù)已知的抑制素?cDNA順序設(shè)計一對引物從陽性克隆板中提取的質(zhì)粒作模板經(jīng)PCR和瓊脂糖電泳證實獲得的片段和預(yù)期片段一致并檢驗讀碼框架以保證其正確性然后培養(yǎng)經(jīng)過檢驗的質(zhì)粒并誘導(dǎo)其表達(dá)純化表達(dá)產(chǎn)物加入佐劑就可制成基因免疫制劑。3.23.2抑制素抑制素DNADNA疫苗的表達(dá)載體選擇疫苗的表達(dá)載體選擇DNA疫

5、苗是將含有抗原基因的重組質(zhì)粒直接導(dǎo)入動物體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的抗原蛋白經(jīng)過抗原遞呈誘發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答。因此在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量比較高的真核表達(dá)載體才能滿足構(gòu)建DNA疫苗的需要。目前抑制素與乙肝表面抗原基因的融合表達(dá)質(zhì)粒(pCIS)的研究已經(jīng)取得積極的進(jìn)展，在哺乳動物如大鼠研究實驗中已經(jīng)證明能夠顯著提高大鼠體內(nèi)FSH水平。如果使用胞內(nèi)系統(tǒng)高效的原核表達(dá)系統(tǒng)也是合適的DNA疫苗載體。目前比較常用的是微生物如大腸桿菌等。抑制素DNA疫苗一般選擇質(zhì)粒載