生長(zhǎng)抑制素基因工程亞單位疫苗對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響.pdf

1、構(gòu)建帶有生長(zhǎng)抑制素的pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒并檢測(cè)其在大腸桿菌中的表達(dá)，并用所表達(dá)的目的蛋白制成生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗，將該疫苗免疫小鼠，研究其對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響，探討生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗免疫小鼠后對(duì)促進(jìn)生長(zhǎng)效果的性別差異性，并研究生長(zhǎng)抑制素不同亞型串聯(lián)后對(duì)促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)的不同效果。為研究獲得經(jīng)濟(jì)高效的生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗，以提高經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的生產(chǎn)效率。
　　1.pET-32a-2SS28

2、-SS14和pET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
　　選用生長(zhǎng)抑制素的兩種亞型SS-14和SS-28，將其混合串聯(lián)到pET-32a表達(dá)系統(tǒng)中，得到pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28兩種重組質(zhì)粒。并通過(guò)PCR擴(kuò)增和測(cè)序鑒定表明，目的基因在pET-32a質(zhì)粒中的插入位點(diǎn)，序列以及方向完全正確。
　　2.2SS28-SS14和3SS28目的蛋白的表達(dá)與純化
　　將pET-32a-2SS2

3、8-SS14和pET-32a-3SS28兩種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coliBL21 De3中，通過(guò)IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌介導(dǎo)表達(dá)出目的蛋白，并通過(guò)western blot分析鑒定，所表達(dá)蛋白為目的蛋白。將菌體超聲破碎后離心對(duì)目的蛋白進(jìn)行可溶性分析以后，將上清進(jìn)行蛋白純化，獲得純化的目的蛋白。
　　3.生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗的制備以及動(dòng)物免疫
　　將誘導(dǎo)純化的目的蛋白與佐劑混合乳化制成生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗，免疫小鼠，選用4周齡離乳昆明

4、鼠60只，雌雄各半。將雌雄各隨機(jī)分3組，每組10只，對(duì)每只做好編號(hào)標(biāo)記。按如下分組進(jìn)行免疫：2SS28-SS14♀：免疫2SS28-SS14蛋白的雌鼠；2SS28-SS14♂：免疫2SS28-SS14蛋白的雄鼠；328AA♀：免疫3SS28蛋白的雌鼠；328AA♂：免疫3SS28蛋白的雄鼠；空白♀：注射生理鹽水白油乳化溶液的雌鼠；空白♂：注射生理鹽水白油乳化溶液的雄鼠。對(duì)4周齡的小鼠初始體重的測(cè)定記錄，并對(duì)其進(jìn)行首次免疫。實(shí)驗(yàn)組每只小鼠

5、免疫100ug蛋白量的相應(yīng)劑量疫苗，對(duì)照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對(duì)照。1周后再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，實(shí)驗(yàn)組每只小鼠免疫50ug蛋白量的相應(yīng)劑量疫苗，對(duì)照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對(duì)照。從4周齡開始到7周齡，每周對(duì)小鼠體重做一次稱重記錄。采用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。免疫兩種疫苗的雌鼠的實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比，差異均不顯著（P>0.05）。免疫3SS28疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比，免疫后第1、第2周體重增

6、加不顯著（p>0.05），第3周平均增重顯著高于空白對(duì)照組（P<0.05）。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比，免疫后第1、第2周平均增重顯著高于空白對(duì)照組（p<0.05）,第3周差異極為顯著（P<0.01）。說(shuō)明生長(zhǎng)抑制素不同亞型的亞單位疫苗對(duì)昆明鼠生長(zhǎng)影響性別差異性較大；從雄鼠的增重效果來(lái)看，SS-14亞型的免疫增重效果優(yōu)于SS-28亞型，說(shuō)明生長(zhǎng)抑制素不同亞型的免疫原性有所差異，導(dǎo)致免疫效果的不同。<

7、br>　　綜上所述，本研究通過(guò)基因克隆技術(shù)成功重組構(gòu)建pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒并檢測(cè)其在大腸桿菌中表達(dá)。并將表達(dá)的目的蛋白純化后制備成生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)免疫3SS28疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比差異顯著（P<0.05）。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比差異極為顯著（P<0.01）。而兩種疫苗對(duì)雌鼠均無(wú)明顯差異性。因此本次研究為