還腦益聰方對D-半乳糖致認(rèn)知功能障礙大鼠模型的影響.pdf

1、目的:
　　 建立復(fù)合因素所致的認(rèn)知功能障礙動物模型,并探討其行為學(xué)、病理形態(tài)、細(xì)胞凋亡、血液流變學(xué)、血脂、氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)各方面指標(biāo)的互聯(lián)關(guān)系及動態(tài)變化,同時觀察還腦益聰方對上述指標(biāo)的影響,闡釋還腦益聰方的作用機理和途徑,為臨床治療認(rèn)知功能障礙提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 本研究共分為兩部分。第一部分,將實驗大鼠隨機分為6周模型組、6周空白組、8周模型組、8周空白組；采用皮下注射D-半乳糖及飼喂半高脂飼

2、料的造模方法,建立認(rèn)知功能障礙動物模型,分別于第6周末及第8周末檢測如下指標(biāo):Morris水迷宮及物體識別試驗檢測大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；HE染色后光鏡觀察海馬形態(tài)學(xué)變化；電鏡觀察海馬超微結(jié)構(gòu)變化；TUNEL法檢測海馬凋亡細(xì)胞數(shù)量；免疫組化法分析海馬抑制凋亡基因bcl-2和促進(jìn)凋亡基因bax的表達(dá)及其比值；試劑盒檢測血漿P-選擇素和PAI-1含量；檢測血液黏度、血小板聚集性、紅細(xì)胞變形性及血清TC、TG、LDL-C、HDI-C的水平；放免法檢

3、測海馬勻漿TNF-α、IL-6的含量；試劑盒檢測海馬勻漿MDA、GSH-PX、GSH-ST、ox-LDL的含量。觀察大鼠行為學(xué)、病理形態(tài)、細(xì)胞凋亡、血液流變學(xué)、血脂、氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)各方面指標(biāo)的變化。第二部分,將實驗大鼠隨機分為中藥高劑量組、中藥低劑量組、陽性對照組、模型對照組、空白對照組,按上法建立動物模型,于第6周末時采用還腦益聰方進(jìn)行治療,繼4周后對上述指標(biāo)進(jìn)行檢測,以觀察還腦益聰方對認(rèn)知功能障礙大鼠各指標(biāo)的影響。
　　

4、 結(jié)果:
　　 第一部分
　　 1.定位航行試驗中,6周模型組逃避潛伏期較空白組延長,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；8周模型組逃避潛伏期較空白組明顯延長(P<0.01)；8周模型組逃避潛伏期較6周模型組明顯延長(P<0.01)。空間探索試驗中,6周模型組穿臺次數(shù)較6周空白組減少,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；8周模型組穿臺次數(shù)較8周空白組明顯減少(P<0.05)；8周模型組穿臺次數(shù)較6周模型組明顯減少(P<0

5、.05)。
　　 2.物體識別試驗中,6周、8周動物的分辨指數(shù)明顯降低,和空白組比較有顯著差異(P<0.05,P<0.01),8周模型組分辨指數(shù)較6周模型組降低,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.HE染色后光鏡下觀察,模型組大鼠海馬病理形態(tài)顯示神經(jīng)元數(shù)量減少,突起明顯稀疏,8周模型組與6周模型組比較有加重；電鏡下觀察模型大鼠海馬細(xì)胞核萎縮,染色質(zhì)呈邊集現(xiàn)象,線粒體萎縮,8周模型組結(jié)構(gòu)變化差于6周模型組。

6、r>　　 4.6周、8周模型組凋亡細(xì)胞明顯增多,和空白組比較有顯著性差異(P<0.01)；8周模型組凋亡細(xì)胞較6周模型組明顯增多(P<0.05)。6周和8周模型組凋亡抑制基因bcl-2陽性表達(dá)率下降,而凋亡促進(jìn)基因bax陽性表達(dá)率升高,和空白組比較有顯著性差異(P<0.05,P<0.01)；8周模型組bcl-2陽性表達(dá)率明顯低于6周模型組(P<0.05),而bax陽性表達(dá)與6周模型組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；6、8周模型

7、組bcl-2與bax的比值明顯減少,與空白組比較有顯著差異(P<0.01)；8周模型組bcl-2與bax的比值較6周模型組減少(P<0.01)。
　　 5.6周、8周模型組P-選擇素含量明顯升高,和空白組比較有顯著差異(P<0.05),8周模型組P-選擇素含量與6周模型組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。6周模型組PAI-1含量與6周空白組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；8周模型組PAI-1含量升高,和8周空白組比

8、較有顯著性差異(P<0.05)；8周模型組PAI-1含量與6周模型組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 6.6周、8周模型組的血液黏度明顯升高,和空白組相比有顯著差異(P<0.05,P<0.01)；8周模型組與6周模型組在各剪切率下血液黏度相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。6周和8周模型組血小板聚集指數(shù)較空白組升高(P<0.05,P<0.01)；8周模型組與6周模型組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。6周

9、模型組血小板最大聚集數(shù)和6周空白組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；8周模型組血小板最大聚集數(shù)較8周空白組增加(P<0.05)；8周模型組血小板最大聚集數(shù)和6周模型組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。6周、8周模型組的紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯升高,和空白組相比有顯著差異(P<0.05)；6周、8周模型組紅細(xì)胞變形指數(shù)與空白組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；6周、8周模型組的纖維蛋白原含量也明顯升高,和空白組比較差異顯著(P

10、<0.05),兩模型組之間相比,指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 7.6周模型組的TC、TG、LDL-C水平明顯升高,與空白組比較有顯著差異(P<0.05),6周模型大鼠的HDL-C水平無明顯降低(P>0.05)；8周模型組TC水平明顯升高,與空白組比較有顯著差異(P<0.01),HDL-C水平明顯降低,和空白組比較有顯著差異(P<0.05)；8周模型組TG水平和6周模型組相比,有顯著性差異(P<0.05)；8周模型

11、組HDL-C水平和6周模型組相比,有顯著差異(P<0.01)。
　　 8.6周、8周模型組大鼠海馬組織的ox-LDL、TNF-α、IL-6水平顯著升高,與空白組比較差異顯著(P<0.05)；8周模型組大鼠IL-6水平高于6周模型組,統(tǒng)計學(xué)處理差異顯著(P<0.05)。6周、8周模型組大鼠海馬組織MDA、GSH-PX的含量明顯上升,和空白組比較有顯著差異(P<0.05)；各組之間的GSH-ST含量無顯著變化(P>0.05)。

12、>　　 第二部分
　　 1.定位航行試驗中,還腦益聰方可改善認(rèn)知功能障礙大鼠學(xué)習(xí)記憶功能,但與模型組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。空間探索試驗中,還腦益聰方及多奈哌齊均可改善模型大鼠記憶功能,陽性組及中藥高劑量組經(jīng)過原平臺的次數(shù)較模型組增加,統(tǒng)計學(xué)處理差異顯著(P<0.05,P<0.01)。
　　 2.物體識別試驗中,多奈哌齊可改善模型大鼠記憶功能,提高分辨指數(shù),與模型組相比,有顯著差異(P<0.05),高、

13、低劑量的還腦益聰方可提高大鼠分辨指數(shù),但與模型組相比,差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.HE染色后光鏡下觀察模型組大鼠海馬區(qū)錐體神經(jīng)細(xì)胞核增大,胞漿染色減弱,少部分核變少,核膜皺縮,染色質(zhì)密集,膠質(zhì)細(xì)胞增多；陽性組較模型組有所好轉(zhuǎn)；還腦益聰方低、高劑量組的病變明顯減輕。電鏡下海馬超微結(jié)構(gòu)顯示:模型組大鼠海馬細(xì)胞核明顯變小,核膜皺縮且增厚,核周出現(xiàn)空暈,線粒體萎縮；陽性組較模型組病變輕；還腦益聰方低、高劑量組皮質(zhì)神經(jīng)

14、細(xì)胞腫脹,基質(zhì)密度不均勻,細(xì)胞器病變有所減輕。
　　 4.高、低劑量的還腦益聰方及多奈哌齊均可減少海馬細(xì)胞凋亡數(shù)量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。多奈哌齊可上調(diào)凋亡抑制基因bc1-2的表達(dá),與模型組比較,有顯著差異(P<0.05)；高、低劑量的還腦益聰方均可上調(diào)bc1-2表達(dá),但與模型組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。高、低劑量的還腦益聰方及多奈哌齊均可下調(diào)凋亡促進(jìn)基因bax的表達(dá),但與模型組比較,差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義

15、(P>0.05)。高、低劑量的還腦益聰方均可提高bc1-2與bax的比值(P<0.01)。
　　 5.高、低劑量的還腦益聰方及多奈哌齊均可顯著降低認(rèn)知功能障礙大鼠血清P-選擇素含量(P<0.05),對。PAI-1含量也有顯著降低作用(P<0.01)。
　　 6.高、低劑量的還腦益聰方及多奈哌齊均可降低5s-1、10s-1、35s-1剪切率下的血液黏度(P<0.05,P<0.01)。高、低劑量的還腦益聰方及多奈哌齊均對血小

16、板聚集有降低趨勢,但差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。高、低劑量的還腦益聰方均可顯著降低認(rèn)知功能障礙大鼠的紅細(xì)胞聚集指數(shù)及血漿纖維蛋白原含量(P<0.05,P<0.01),對紅細(xì)胞變形指數(shù)無明顯影響(P>0.05)。
　　 7.高、低劑量的還腦益聰方均對大鼠TG水平有降低作用,和模型組比較有顯著差異(P<0.05),但對TC、LDL-C和。HDL-C水平無明顯影響(P>0.05)。
　　 8.高劑量的還腦益聰方能顯著降

17、低大鼠大腦ox-LDL含量,與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。低、高劑量的還腦益聰方均能顯著降低大鼠TNF-α含量。低、高劑量的還腦益聰方對IL-6含量有降低趨勢,統(tǒng)計學(xué)處理差異尚不顯著(P>0.05),多奈哌齊能明顯降低大鼠大腦IL-6的含量,與模型組相比有顯著差異(P<0.01)。高、低劑量的還腦益聰方及多奈哌齊均對MDA有降低作用,但差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。高、低劑量還腦益聰方及多奈哌齊均可降低大鼠GSH-PX及