MG132、DDP聯(lián)合用藥對卵巢癌細胞Caov-3增殖、凋亡的影響及其作用機制的研究.pdf

1、目的：研究蛋白酶抑制劑MG132與DDP聯(lián)合用藥對卵巢癌細胞株Caov-3增殖和凋亡的影響，同時檢測細胞內(nèi)NF-κB、caspase-3以及VEGF的表達情況，了解MG132的體外抗卵巢癌作用及其可能的作用機制，為蛋白酶抑制劑在卵巢癌治療方面提供重要的實驗室基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法： 1、采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法，檢測24h、36h、48h Caov-3細胞的生長抑制率。陰性對照組：加1640培養(yǎng)基；MG132組：終

2、濃度為1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM；DDP組：終濃度為1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μ9/ml；聯(lián)合用藥組：5μM的MG132預(yù)處理2h，DDP終濃度同DDP單獨用藥組。 2、采用流式細胞儀檢測24h Caov-3細胞的凋亡率。 陰性對照組：加1640培養(yǎng)基；DDP組：終濃度為2.5μg/ml；聯(lián)合用藥組：DDP終濃度為2.5μg/ml，MG132預(yù)處理2h的濃度分別為2

3、.5μM、5μM、10μM。 3、免疫組化SP法測定藥物作用24h后Caov-3細胞中NF-κB、caspase-3以及VEGF的表達情況，實驗分組與流式細胞檢測細胞凋亡分組相同。 結(jié)果： 1.MG132濃度為1.25μM、2.5μM、5μM、10μM和20μM時，作用24h、36h、48h均明顯抑制Caov-3細胞的增殖，并具有時間-劑量依賴性。同一時間內(nèi)，隨著MG132濃度升高，Caov-3的CGIR增高，不

4、同濃度組間的CGIR差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。濃度相同時，隨著MG132作用時間的延長，Caov-3的CGIR增高，不同時間組間的CGIR差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。24h、36h、48h，Caov-3的IC50分別為：5.87μM、3.75μM、2.41μM。 2.DDP聯(lián)合應(yīng)用MG132時能顯著提高DDP對Caov-3細胞的殺傷能力。單用DDP1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml和10μg/ml分

5、別作用24h、36h、48h時的IC50為6.21μg/ml、3.41μg/ml、2.24μg/ml。用5μM的MG132預(yù)處理2h后，DDP的IC50改變?yōu)?.35μg/ml、2.14μg/ml、1.45μg/ml。聯(lián)合應(yīng)用MG132、DDP與單獨使用DDP對卵巢癌細胞的生長抑制率相比，差異有顯著性(P<0.01)。 3.采用流式細胞儀檢測Caov-3細胞的凋亡率，2.5μg/ml的DDP作用24h小時后，細胞凋亡率為10.7

6、8％，用MG132預(yù)處理2h再聯(lián)合DDP用藥后細胞凋亡增加更明顯，細胞凋亡率在預(yù)處理MG132濃度為2.5μM、5μM、10μM時分別為17.21％、28.08％、43.50％，顯著高于陰性對照組、DDP組，聯(lián)合用藥組各組間兩兩比較差異有顯著性(P<0.01)。 4.免疫組化SP法顯示MG132、DDP聯(lián)合用藥作用24h小時后Caov-3細胞中NF-κB、VEGF的表達下調(diào)，caspase-3表達增加。與對照組、DDP組比較差異

7、有顯著性(P<0.01)，聯(lián)合用藥組各組間兩兩比較差異有顯著性(P<0.01)。 結(jié)論： 1.MG132能有效抑制卵巢癌細胞Caov-3增殖。 2.MG132能誘導(dǎo)卵巢癌細胞Caov-3凋亡，其部分作用機制可能是通過抑制NF-κB的活化并促進caspase-3的表達來抑制腫瘤生長和誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。 3.MG132能下調(diào)VEGF的表達，可能與抑制NF-κB信號傳導(dǎo)通路有關(guān)。 4.MG132能夠增強